| 中文摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一部分 以Hsc70为靶点的抗HCV药物研究与实践 | 第16-59页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 实验材料 | 第19-26页 |
| 1. 细胞系 | 第19页 |
| 2. 药物 | 第19页 |
| 3. 主要生化试剂 | 第19-20页 |
| 4. 抗体 | 第20页 |
| 5. 质粒和细菌菌株 | 第20-22页 |
| 6. 分子生物学试剂盒 | 第22页 |
| 7. 引物和探针 | 第22-24页 |
| 8. 实验动物 | 第24页 |
| 9. 主要仪器 | 第24-26页 |
| 实验方法 | 第26-37页 |
| 1. 感染性HCV病毒的制备 | 第26-28页 |
| ·HCV cDNA的合成 | 第26页 |
| ·RNA的体外转录合成与纯化 | 第26页 |
| ·HCV RNA转染 | 第26-27页 |
| ·病毒核酸定量检测 | 第27-28页 |
| 2. HCV病毒感染与测定 | 第28页 |
| 3. 细胞内Hsc70基因表达水平对HCV复制的影响 | 第28-32页 |
| ·Hsc70质粒的构建 | 第28-31页 |
| ·Hsc70基因表达调控HCV复制 | 第31-32页 |
| 4. IMB-DM122对Hsc70 mRNA稳定性的机理研究 | 第32-33页 |
| ·Hsc70 mRNA半衰期测定 | 第32页 |
| ·重组质粒构建及表达 | 第32-33页 |
| ·Hsc70 mRNA 3'UTR分析 | 第33页 |
| 5. IMB-DM122抗HCV活性的研究 | 第33-35页 |
| ·RNA甲醛变性电泳和Northern blot | 第33页 |
| ·探针的生物素标记和杂交 | 第33-34页 |
| ·免疫荧光分析 | 第34-35页 |
| ·Western blot | 第35页 |
| ·IMB-DM122对HCV毒粒中Hsc70包装的影响 | 第35页 |
| 6. IMB-DM122体内和体外安全性测定 | 第35-36页 |
| ·体内急性毒性分析 | 第35-36页 |
| ·体外细胞毒测定 | 第36页 |
| 7. 统计学分析 | 第36-37页 |
| 实验结果 | 第37-48页 |
| 1. IMB-DM122下调胞内Hsc70 mRNA水平 | 第37-38页 |
| 2. IMB-DM122通过降低Hsc70 mRNA的稳定性来下调其表达 | 第38-39页 |
| 3. IMB-DM122在Hsc70 mRNA上的反应元件位于3'UTR | 第39-40页 |
| 4. IMB-DM122通过减少胞内Hsc70实现抗HCV活性 | 第40-44页 |
| 5. IMB-DM122通过减少HCV病毒颗粒内Hsc70含量抑制病毒复制 | 第44-45页 |
| 6. IMB-DM122的体内、外安全性分析 | 第45-48页 |
| 讨论 | 第48-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 第二部分 以宿主细胞蛋白hA3G为靶点的抗HIV-1药物研究探索 | 第59-80页 |
| 前言 | 第59-61页 |
| 实验材料 | 第61-65页 |
| 1. 细胞系与病毒 | 第61页 |
| 2. 抗体 | 第61页 |
| 3. 药物和生化试剂 | 第61-62页 |
| 4. 质粒和菌株 | 第62页 |
| 5. 分子生物学试剂盒 | 第62页 |
| 6. 引物和探针 | 第62-64页 |
| 7. 主要仪器 | 第64页 |
| 8. 实验动物 | 第64-65页 |
| 实验方法 | 第65-71页 |
| 1. hA3G/E67Q结构包装分析 | 第65-67页 |
| ·Overlap PCR法构建质粒DNA | 第65-66页 |
| ·hA3G/E67Q包装结构检测 | 第66-67页 |
| 2. 定量分析不同细胞中hA3G表达水平 | 第67-68页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第67页 |
| ·逆转录反应 | 第67页 |
| ·常规PCR半定量分析 | 第67页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及PCR扩增产物中DNA片段的回收和纯化 | 第67页 |
| ·PCR产物与pGEM-T Easy vectors连接 | 第67页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞转化与质粒小量快速提取 | 第67页 |
| ·实时荧光定量PCR分析 | 第67-68页 |
| 3. 化合物抗HIV-1药效学评价 | 第68-69页 |
| ·化合物稀释 | 第68页 |
| ·HIV-1病毒感染 | 第68页 |
| ·种板给药 | 第68-69页 |
| ·MTT法检测化合物对细胞的毒性 | 第69页 |
| ·ELISA法检测HIV-1 P24 | 第69页 |
| 4. 表面等离子共振实验 | 第69-70页 |
| 5. 体内急性毒性分析 | 第70-71页 |
| 实验结果与讨论 | 第71-79页 |
| 1. 人体不同HIV相关细胞系中内源性hA3G mRNA表达水平比较 | 第71-73页 |
| ·常规RT-PCR法半定量比较不同细胞中A3G mRNA表达水平 | 第71页 |
| ·实时荧光定量PCR定量比较不同细胞系中hA3G mRNA表达水 | 第71-73页 |
| 2. IMB-26/35与hA3G结合发挥抗HIV-1活性 | 第73-75页 |
| 3. 以hA3G/Vif为靶点的抗HIV-1化合物筛选 | 第75-77页 |
| 4. IMB-26的体内安全性分析 | 第77-79页 |
| 结论 | 第79-80页 |
| 附:hA3G/E67Q包装机制研究 | 第80-85页 |
| 实验方法 | 第80页 |
| 实验结果与讨论 | 第80-85页 |
| 1. hA3G包装机制研究 | 第80-83页 |
| 2. E67Q包装机制研究 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 文献综述:APOBEC3G抗HIV-1的分子机理研究进展 | 第87-98页 |
| 博士学习期间发表的文章 | 第98页 |
| 申请专利 | 第98页 |
| 会议投稿 | 第98-99页 |
| 附录 | 第99-110页 |
| 致谢 | 第110页 |
