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小白菜镉抗性形成代谢关键基因的克隆及胁迫表达研究

摘要第1-8页
Abstract第8-10页
1. 文献综述第10-20页
   ·引言第10-11页
     ·相关研究概述第11-19页
     ·Cd 特性及在植物中的累积特点第11-12页
     ·我国农田及蔬菜Cd 污染状况第12-13页
     ·植物重金属累积特性及资源筛选第13-14页
     ·植物对重金属的忍耐防御机制第14-19页
   ·本研究的意义和内容第19-20页
2 不同小白菜基因型的Cd 累积特性与GSH 含量第20-25页
   ·材料第20页
   ·方法第20-21页
     ·供试材料的水培与Cd 胁迫培养第20-21页
     ·Cd含量的测定第21页
     ·谷胱甘肽(GSH)含量的测定第21页
   ·结果与分析第21-24页
     ·小白菜不同基因型的Cd 含量第21-22页
     ·小白菜不同基因型的还原性GSH 含量第22-24页
   ·小结与讨论第24-25页
3. O-乙基-丝氨酸连接酶(OASA)家族基因的克隆第25-48页
   ·材料第25-26页
   ·方法第26-31页
     ·供试材料的营养液培养及Cd 胁迫培养第26页
     ·总RNA 提取第26页
     ·第一链cDNA 的合成第26页
     ·小白菜OASA 家族基因cDNA 片段的PCR 扩增第26-28页
     ·OASA4、OASA6 基因cDNA 全长的RACE 扩增第28-29页
     ·OASA4 基因cDNA 全长PCR 扩增及真核载体构建第29-31页
   ·结果与分析第31-45页
     ·RNA 抽提第31页
     ·OASA4、OASA6、OASA6-2 保守序列的获得第31-33页
     ·OASA4、OASA6 基因 3ˊ端序列和 5ˊ 端序列的获得第33-34页
     ·OASA4、OASA6 全长拼结,及OASA4 基因编码区扩增第34-38页
     ·OASA4、OASA6、OASA6-2 基因氨基酸序列分析第38-40页
     ·OASA4、OASA6基因蛋白结构分析第40-41页
     ·OASA4、OASA6 基因同源性分析第41-45页
     ·OASA4 真核表达载体构建第45页
   ·小结与讨论第45-48页
4. γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆及真核载体构建第48-59页
   ·材料第48页
   ·方法第48-51页
     ·供试材料培养、RNA 提取、第一链cDNA 的合成第48页
     ·小白菜γ-GCS 基因cDNA 片段PCR 扩增第48-49页
     ·γ-GCS 基因cDNA 全长的RACE 扩增第49页
     ·γ-GCS 基因cDNA 全长PCR 扩增扩增及真核载体构建第49-51页
   ·结果与分析第51-57页
     ·γ-GCS 基因保守序列的获得第51-52页
     ·γ-GCS 基因3ˊ端、5ˊ端序列的获得第52页
     ·γ-GCS 基因全长拼结及编码区扩增第52-54页
     ·γ-GCS 基因编码区氨基酸序列分析第54-55页
     ·γ-GCS 基因编码的蛋白结构分析第55-56页
     ·γ-GCS 基因同源性分析第56-57页
     ·γ-GCS 真核表达载体构建第57页
   ·小结与讨论第57-59页
5. 谷胱甘肽合成酶(GSHS)基因的克隆及真核载体构建第59-70页
   ·材料第59页
   ·方法第59-62页
     ·供试材料培养、RNA 提取、第一链cDNA 的合成第59页
     ·小白菜GSHS 基因cDNA 片段的PCR 扩增第59-60页
     ·GSHS 基因cDNA 全长的RACE 扩增第60页
     ·GSHS 基因cDNA 全长PCR 扩增及真核载体构建第60-62页
   ·结果与分析第62-68页
     ·GSHS 保守序列的获得第62-63页
     ·GSHS 基因基因 3ˊ端序列、5ˊ 端序列的获得第63页
     ·GSHS 全长拼结及GSHS 基因编码区扩增第63-65页
     ·GSHS 基因编码区氨基酸序列分析第65-66页
     ·GSHS 基因编码的蛋白结构分析第66页
     ·GSHS 基因同源性分析第66-68页
     ·GSHS 基因真核表达载体构建第68页
   ·小结与讨论第68-70页
6. 金属硫蛋白A(MTa)基因的克隆第70-79页
   ·材料第70页
   ·方法第70-71页
     ·供试材料培养、RNA 提取、第一链cDNA 的合成第70页
     ·小白菜MTa 基因cDNA 片段的PCR 扩增第70-71页
     ·MTa 基因cDNA 全长的RACE 扩增第71页
   ·结果与分析第71-77页
     ·MTa 保守序列的获得第71-72页
     ·MTa 基因 3ˊ端序列、5ˊ端序列的获得第72-73页
     ·MTa 全长拼接,及MTa 基因编码区扩增第73-74页
     ·MTa 基因编码区氨基酸序列分析第74页
     ·MTa 基因编码的蛋白结构分析第74-75页
     ·MTa 基因同源性分析第75-77页
   ·小结与讨论第77-79页
7. 小白菜OASA4、γ-GCS、GSHS、MTa 基因的转录分析第79-87页
   ·材料第79页
   ·方法第79-80页
   ·结果与分析第80-85页
     ·RNA 抽提第80-81页
     ·扩增结果第81-82页
     ·转录变化第82-85页
   ·小结与讨论第85-87页
8. 总结与提高第87-90页
   ·总结第87-88页
   ·提高第88-89页
   ·展望第89-90页
参考文献第90-98页
附录1:本研究NCBI 登陆序列第98-103页
附录2:本研究所克隆基因编码区蛋白3D 结构模拟图第103-104页
附录3:不同小白菜基因型Cd 胁迫生长表现图第104-105页
附录4:试剂盒及部分试验方法第105-112页
附录 5:缩略词表第112-113页
致谢第113页

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