摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
1. 文献综述 | 第10-20页 |
·引言 | 第10-11页 |
·相关研究概述 | 第11-19页 |
·Cd 特性及在植物中的累积特点 | 第11-12页 |
·我国农田及蔬菜Cd 污染状况 | 第12-13页 |
·植物重金属累积特性及资源筛选 | 第13-14页 |
·植物对重金属的忍耐防御机制 | 第14-19页 |
·本研究的意义和内容 | 第19-20页 |
2 不同小白菜基因型的Cd 累积特性与GSH 含量 | 第20-25页 |
·材料 | 第20页 |
·方法 | 第20-21页 |
·供试材料的水培与Cd 胁迫培养 | 第20-21页 |
·Cd含量的测定 | 第21页 |
·谷胱甘肽(GSH)含量的测定 | 第21页 |
·结果与分析 | 第21-24页 |
·小白菜不同基因型的Cd 含量 | 第21-22页 |
·小白菜不同基因型的还原性GSH 含量 | 第22-24页 |
·小结与讨论 | 第24-25页 |
3. O-乙基-丝氨酸连接酶(OASA)家族基因的克隆 | 第25-48页 |
·材料 | 第25-26页 |
·方法 | 第26-31页 |
·供试材料的营养液培养及Cd 胁迫培养 | 第26页 |
·总RNA 提取 | 第26页 |
·第一链cDNA 的合成 | 第26页 |
·小白菜OASA 家族基因cDNA 片段的PCR 扩增 | 第26-28页 |
·OASA4、OASA6 基因cDNA 全长的RACE 扩增 | 第28-29页 |
·OASA4 基因cDNA 全长PCR 扩增及真核载体构建 | 第29-31页 |
·结果与分析 | 第31-45页 |
·RNA 抽提 | 第31页 |
·OASA4、OASA6、OASA6-2 保守序列的获得 | 第31-33页 |
·OASA4、OASA6 基因 3ˊ端序列和 5ˊ 端序列的获得 | 第33-34页 |
·OASA4、OASA6 全长拼结,及OASA4 基因编码区扩增 | 第34-38页 |
·OASA4、OASA6、OASA6-2 基因氨基酸序列分析 | 第38-40页 |
·OASA4、OASA6基因蛋白结构分析 | 第40-41页 |
·OASA4、OASA6 基因同源性分析 | 第41-45页 |
·OASA4 真核表达载体构建 | 第45页 |
·小结与讨论 | 第45-48页 |
4. γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆及真核载体构建 | 第48-59页 |
·材料 | 第48页 |
·方法 | 第48-51页 |
·供试材料培养、RNA 提取、第一链cDNA 的合成 | 第48页 |
·小白菜γ-GCS 基因cDNA 片段PCR 扩增 | 第48-49页 |
·γ-GCS 基因cDNA 全长的RACE 扩增 | 第49页 |
·γ-GCS 基因cDNA 全长PCR 扩增扩增及真核载体构建 | 第49-51页 |
·结果与分析 | 第51-57页 |
·γ-GCS 基因保守序列的获得 | 第51-52页 |
·γ-GCS 基因3ˊ端、5ˊ端序列的获得 | 第52页 |
·γ-GCS 基因全长拼结及编码区扩增 | 第52-54页 |
·γ-GCS 基因编码区氨基酸序列分析 | 第54-55页 |
·γ-GCS 基因编码的蛋白结构分析 | 第55-56页 |
·γ-GCS 基因同源性分析 | 第56-57页 |
·γ-GCS 真核表达载体构建 | 第57页 |
·小结与讨论 | 第57-59页 |
5. 谷胱甘肽合成酶(GSHS)基因的克隆及真核载体构建 | 第59-70页 |
·材料 | 第59页 |
·方法 | 第59-62页 |
·供试材料培养、RNA 提取、第一链cDNA 的合成 | 第59页 |
·小白菜GSHS 基因cDNA 片段的PCR 扩增 | 第59-60页 |
·GSHS 基因cDNA 全长的RACE 扩增 | 第60页 |
·GSHS 基因cDNA 全长PCR 扩增及真核载体构建 | 第60-62页 |
·结果与分析 | 第62-68页 |
·GSHS 保守序列的获得 | 第62-63页 |
·GSHS 基因基因 3ˊ端序列、5ˊ 端序列的获得 | 第63页 |
·GSHS 全长拼结及GSHS 基因编码区扩增 | 第63-65页 |
·GSHS 基因编码区氨基酸序列分析 | 第65-66页 |
·GSHS 基因编码的蛋白结构分析 | 第66页 |
·GSHS 基因同源性分析 | 第66-68页 |
·GSHS 基因真核表达载体构建 | 第68页 |
·小结与讨论 | 第68-70页 |
6. 金属硫蛋白A(MTa)基因的克隆 | 第70-79页 |
·材料 | 第70页 |
·方法 | 第70-71页 |
·供试材料培养、RNA 提取、第一链cDNA 的合成 | 第70页 |
·小白菜MTa 基因cDNA 片段的PCR 扩增 | 第70-71页 |
·MTa 基因cDNA 全长的RACE 扩增 | 第71页 |
·结果与分析 | 第71-77页 |
·MTa 保守序列的获得 | 第71-72页 |
·MTa 基因 3ˊ端序列、5ˊ端序列的获得 | 第72-73页 |
·MTa 全长拼接,及MTa 基因编码区扩增 | 第73-74页 |
·MTa 基因编码区氨基酸序列分析 | 第74页 |
·MTa 基因编码的蛋白结构分析 | 第74-75页 |
·MTa 基因同源性分析 | 第75-77页 |
·小结与讨论 | 第77-79页 |
7. 小白菜OASA4、γ-GCS、GSHS、MTa 基因的转录分析 | 第79-87页 |
·材料 | 第79页 |
·方法 | 第79-80页 |
·结果与分析 | 第80-85页 |
·RNA 抽提 | 第80-81页 |
·扩增结果 | 第81-82页 |
·转录变化 | 第82-85页 |
·小结与讨论 | 第85-87页 |
8. 总结与提高 | 第87-90页 |
·总结 | 第87-88页 |
·提高 | 第88-89页 |
·展望 | 第89-90页 |
参考文献 | 第90-98页 |
附录1:本研究NCBI 登陆序列 | 第98-103页 |
附录2:本研究所克隆基因编码区蛋白3D 结构模拟图 | 第103-104页 |
附录3:不同小白菜基因型Cd 胁迫生长表现图 | 第104-105页 |
附录4:试剂盒及部分试验方法 | 第105-112页 |
附录 5:缩略词表 | 第112-113页 |
致谢 | 第113页 |