| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-23页 |
| ·他汀类药物概述 | 第9-13页 |
| ·他汀类药物的发现与分类 | 第9-10页 |
| ·他汀类药物的临床应用与市场分析 | 第10-11页 |
| ·他汀类药物的生物活性 | 第11-13页 |
| ·美伐他汀的生物合成 | 第13-15页 |
| ·美伐他汀的生物合成途径 | 第13-14页 |
| ·美伐他汀生物合成基因的分类 | 第14-15页 |
| ·他汀类药物的的基因工程 | 第15-18页 |
| ·辛伐他汀的生物催化合成 | 第15-17页 |
| ·过表达生物合成基因提高他汀产量 | 第17-18页 |
| ·酰基转移酶研究概况 | 第18-19页 |
| ·定向突变在酶工程中的应用 | 第19-23页 |
| ·基于PCR方法的基因定点突变 | 第19-21页 |
| ·酶工程中的生物信息学分析 | 第21-23页 |
| 第2章 绪论 | 第23-24页 |
| 第3章 材料与方法 | 第24-35页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·菌株与载体 | 第24页 |
| ·主要试剂与酶 | 第24页 |
| ·培养基组成 | 第24页 |
| ·常用溶液 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·引物合成与序列测定 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·橘青霉总RNA的提取与鉴定 | 第25-26页 |
| ·mlcH cDNA的获得 | 第26-28页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第28-29页 |
| ·双酶切、连接及转化 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第30页 |
| ·表达重组菌的构建 | 第30页 |
| ·目的基因的表达和SDS-PAGE分析 | 第30页 |
| ·包涵体的纯化及透析复性 | 第30-31页 |
| ·MlcH蛋白的HPLC活性检测 | 第31-32页 |
| ·不同pH、温度对于酶催化水解反应的影响 | 第32页 |
| ·酶生物信息学分析与定点突变设计 | 第32页 |
| ·mlcH与lovD的同源性比对 | 第32页 |
| ·M1cH蛋白的三维建模与突变位点分析 | 第32页 |
| ·酶的可溶性改造与表达 | 第32-35页 |
| ·大引物PCR方法进行C65A的定点突变 | 第33-34页 |
| ·突变蛋白MlcH(t)可溶性的SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| 第4章 实验结果 | 第35-46页 |
| ·RT-PCR方法获得mlcH的cDNA序列 | 第35页 |
| ·mlcH基因测序结果 | 第35页 |
| ·重组质粒pET28a(+)-mlcH的构建与酶切鉴定 | 第35-37页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第37页 |
| ·MlcH蛋白表达形式的分析 | 第37-38页 |
| ·包涵体蛋白的纯化与透析复性 | 第38-39页 |
| ·MlcH蛋白美伐他汀水解活性的HPLC分析 | 第39-40页 |
| ·pH、温度对于酶催化反应的影响 | 第40-41页 |
| ·生物信息学分析与定向突变 | 第41-46页 |
| ·MlcH蛋白三级结构同源建模 | 第41-42页 |
| ·MlcH蛋白序列中突变热点的预测 | 第42-43页 |
| ·大引物PCR法进行C65A定向突变 | 第43-44页 |
| ·C65A突变后基因测序分析 | 第44-45页 |
| ·C65A突变蛋白可溶性分析 | 第45-46页 |
| 第5章 结果分析与展望 | 第46-49页 |
| ·橘青霉MlcH蛋白表达与纯化 | 第46-47页 |
| ·表达条件与表达形式的研究 | 第46页 |
| ·包涵体蛋白的复性 | 第46-47页 |
| ·MlcH蛋白的酶学性质分析 | 第47页 |
| ·MlcH蛋白可溶性的优化 | 第47-48页 |
| ·定向突变的研究 | 第47页 |
| ·融合蛋白表达 | 第47-48页 |
| ·表达载体更换的影响 | 第48页 |
| ·展望 | 第48-49页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第49-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57页 |