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CK1α基因shRNA表达载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-8页
第一部分 前言第8-24页
   ·CK1α基因的研究进展第8-17页
   ·RNA干扰的概述第17-23页
   ·本课题的立论依据、目的及意义第23-24页
第二部分 实验材料和仪器设备第24-28页
   ·主要材料与试剂第24-26页
   ·主要仪器设备第26-28页
第三部分 实验方法第28-34页
   ·CK1α基因转录产物种类及其大小的确定第28页
   ·CK1α mRNA在不同细胞中表达分析第28-29页
   ·干扰位点及发夹结构的设计第29页
   ·pGenesil-shRNA重组质粒的构建第29-31页
   ·重组质粒转染A549细胞第31页
   ·G418筛选建立稳定转染细胞系第31页
   ·RT-PCR检测干扰效率第31页
   ·Western blotting检测干扰效率第31-32页
   ·A549、A549-NK及A549-S1三者生长曲线的比较第32页
   ·CCK-8细胞增殖实验第32页
   ·细胞流式检测细胞周期第32页
   ·统计学处理第32-34页
第四部分 实验结果第34-44页
   ·CK1α基因转录产物种类及其大小的确定结果第34页
   ·CK1α mRNA在不同细胞中表达分析结果第34-35页
   ·pGenesil-1质粒的酶切鉴定结果第35-36页
   ·重组pGenesil-shRNA质粒的酶切鉴定结果第36页
   ·重组pGenesil-shRNA质粒测序结果第36-37页
   ·倒置荧光显微镜观察细胞转染的结果第37-38页
   ·RT-PCR检测结果第38-39页
   ·Western blotting检测结果第39-40页
   ·A549、A549-NK及A549-S1三者生长曲线的比较结果第40页
   ·CCK-8细胞增殖实验结果第40-41页
   ·细胞周期分布检测结果第41-44页
第五部分 讨论第44-50页
   ·靶基因的选取第44-45页
   ·靶基因的转录分析及细胞株的选取第45页
   ·RNA干扰方法的选取及结果分析第45-46页
   ·RNA干扰效果检测方法的选取第46页
   ·细胞增殖实验的方法选取及结果分析第46-47页
   ·结论及展望第47-50页
第六部分 参考文献第50-60页
附录Ⅰ 英文缩略词索引第60-62页
附录Ⅱ CSNK1A1(CK1αLS)基因序列第62-64页
附录Ⅲ 本研究中所用试剂配方第64-68页
在校期间发表论文第68-70页
致谢第70页

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