| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-46页 |
| 第一节 微管与微管结合蛋白 | 第16-25页 |
| ·微管的结构特性 | 第16-19页 |
| ·微管结合蛋白 | 第19-22页 |
| ·含有CAP-Gly结构域的微管结合蛋白 | 第22-25页 |
| 第二节 细胞迁移与血管新生 | 第25-34页 |
| ·细胞迁移和血管新生 | 第26-28页 |
| ·细胞迁移和细胞骨架 | 第28-31页 |
| ·细胞迁移的信号调控 | 第31-34页 |
| 第三节 细胞有丝分裂 | 第34-40页 |
| ·有丝分裂的五个时期 | 第34-35页 |
| ·纺锤体的组装与调控 | 第35-37页 |
| ·染色体的运动与分离 | 第37-40页 |
| 第四节 CYLD的结构及功能 | 第40-46页 |
| ·CYLD与肿瘤的关系 | 第40-41页 |
| ·CYLD对信号通路的调节 | 第41-44页 |
| ·CYLD在发育和疾病中的作用 | 第44页 |
| ·研究CYLD与微管相互作用的重要意义 | 第44-46页 |
| 第二章 CYLD调节微管的结构特性 | 第46-65页 |
| 第一节 材料与方法 | 第46-52页 |
| ·试剂 | 第46页 |
| ·细胞培养 | 第46-47页 |
| ·细胞转染 | 第47页 |
| ·质粒来源及质粒构建 | 第47-49页 |
| ·蛋白质原核表达和纯化 | 第49页 |
| ·抗体制备 | 第49-50页 |
| ·体外转录翻译 | 第50页 |
| ·免疫荧光显微实验 | 第50页 |
| ·免疫印迹分析 | 第50页 |
| ·免疫沉淀 | 第50-51页 |
| ·GST下拉实验 | 第51页 |
| ·微管共沉淀实验 | 第51页 |
| ·微管再生实验 | 第51-52页 |
| ·微管蛋白混浊度检测实验 | 第52页 |
| ·划痕愈合实验 | 第52页 |
| 第二节 实验结果 | 第52-63页 |
| ·CYLD在细胞内及体外与微管相互作用 | 第52-54页 |
| ·CYLD在细胞内及体外与微管蛋白相互作用 | 第54-56页 |
| ·CAP-Gly结构域介导CYLD与微管及微管蛋白的相互作用 | 第56-57页 |
| ·CYLD沉默延缓微管再生 | 第57-59页 |
| ·CYLD在体外促进微管组装及微管稳定 | 第59-61页 |
| ·CYLD对细胞迁移具有重要作用 | 第61-63页 |
| 第三节 讨论 | 第63-65页 |
| ·CYLD作为CAP-Gly蛋白成员与微管相互作用 | 第63页 |
| ·CYLD的CAP-Gly结构域与微管的结合方式 | 第63-64页 |
| ·CYLD作为CAP-Gly蛋白对微管动态性的调节 | 第64页 |
| ·CYLD对微管动态性的调节与细胞活动的关系 | 第64-65页 |
| 第三章 CYLD调节细胞迁移和血管新生 | 第65-86页 |
| 第一节 材料与方法 | 第65-70页 |
| ·质粒来源 | 第65-66页 |
| ·细胞培养及转染 | 第66页 |
| ·内皮细胞成管实验 | 第66页 |
| ·细胞铺展实验 | 第66-67页 |
| ·三维毛细血管出芽形成实验 | 第67页 |
| ·体内血管新生诱导实验 | 第67-68页 |
| ·划痕愈合实验 | 第68页 |
| ·免疫荧光显微实验 | 第68页 |
| ·活细胞成像实验 | 第68-69页 |
| ·免疫印迹分析 | 第69页 |
| ·Rac1活性检测实验 | 第69页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第69-70页 |
| 第二节 实验结果 | 第70-82页 |
| ·CYLD沉默削弱体外血管新生 | 第70-73页 |
| ·CYLD对体内血管新生应答至关重要 | 第73-76页 |
| ·CYLD通过介导细胞铺展及迁移来调节血管新生 | 第76-78页 |
| ·CYLD调节微管的动态性和迁移细胞的极化 | 第78-80页 |
| ·Rac1活化在CYLD调节细胞迁移及管状结构形成中的作用 | 第80-82页 |
| 第三节 讨论 | 第82-86页 |
| ·CYLD是一个新的血管新生调节因子 | 第82-83页 |
| ·CYLD siRNA不影响HUVEC细胞干扰素的表达 | 第83-84页 |
| ·CYLD在血管内皮细胞中表达调控 | 第84页 |
| ·CYLD对微管动态性的调节机制 | 第84页 |
| ·CYLD调节Rac1的活化 | 第84-86页 |
| 第四章 CYLD调节细胞有丝分裂 | 第86-104页 |
| 第一节 材料与方法 | 第86-89页 |
| ·质粒来源及质粒构建 | 第86-88页 |
| ·细胞培养及其转染 | 第88页 |
| ·荧光素酶报告基因检测实验 | 第88页 |
| ·细胞分裂纺锤体定位观察 | 第88页 |
| ·GST下拉实验 | 第88-89页 |
| ·细胞分裂染色体运动观察 | 第89页 |
| ·激酶实验 | 第89页 |
| 第二节 实验结果 | 第89-99页 |
| ·CYLD调节纺锤体的定位 | 第89-90页 |
| ·CYLD介导微管与膜的结合 | 第90-91页 |
| ·CYLD与EB1相互作用 | 第91-93页 |
| ·CYLD形成二聚体 | 第93-95页 |
| ·CYLD调节染色体的分离 | 第95-97页 |
| ·CYLD和EB1调节Aurora-B激酶活性 | 第97-98页 |
| ·CYLD调节细胞增殖 | 第98-99页 |
| 第三节 讨论 | 第99-104页 |
| ·CYLD介导微管对细胞皮层捕获的机制 | 第99-100页 |
| ·过表达EB1不能补救CYLD沉默对纺锤体定位的影响 | 第100页 |
| ·微管结合蛋白的二聚化作用 | 第100-101页 |
| ·CYLD的二聚化不影响其去泛素化酶的活性 | 第101-102页 |
| ·CYLD和EB1在微管动态性调节中的协同作用 | 第102-103页 |
| ·CYLD和EB1对Aurora-B激酶活性的调节 | 第103页 |
| ·CYLD对染色体分离的调节与肿瘤发生的关系 | 第103-104页 |
| 第五章 结论与展望 | 第104-107页 |
| 第一节 结论 | 第104-105页 |
| 第二节 展望 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 个人简历 在学期间发表的学术论文及研究成果 | 第120页 |
