| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第14-19页 |
| 引言 | 第19-22页 |
| 实验器材与仪器 | 第22-27页 |
| 1 实验动物、细胞株 | 第22页 |
| 2 实验仪器 | 第22页 |
| 3 实验试剂、耗材 | 第22-23页 |
| 3.1 细胞培养试剂 | 第22-23页 |
| 3.2 分子实验试剂 | 第23页 |
| 3.3 抗体 | 第23页 |
| 3.4 病毒 | 第23页 |
| 3.5 实验耗材 | 第23页 |
| 4 常用实验液体配制 | 第23-27页 |
| 4.1 PFOS配置 | 第23-24页 |
| 4.2 实验相关溶液 | 第24-27页 |
| 实验方法 | 第27-33页 |
| 1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 1.1 原代小鼠胚胎成纤维(Mouse embryonic fibroblast, MEF)细胞提取 | 第27页 |
| 1.2 饲养层细胞制备 | 第27页 |
| 1.3 小鼠ES细胞支持培养 | 第27-28页 |
| 2 ES细胞分化 | 第28页 |
| 2.1 悬滴培养 | 第28页 |
| 2.2 贴壁培养 | 第28页 |
| 3 搏动率计算 | 第28页 |
| 4 Western-blot | 第28-30页 |
| 4.1 蛋白提取 | 第29页 |
| 4.2 Western-blot | 第29-30页 |
| 5 小鼠ES细胞衍生心肌细胞的纯化方法 | 第30页 |
| 6 透射电镜观察小鼠ES细胞衍生心肌细胞中线粒体和自噬体结构 | 第30页 |
| 7 细胞免疫荧光检测蛋白表达及定位 | 第30-31页 |
| 8 线粒体膜电位检测 | 第31页 |
| 9 RFP-GFP-LC3双荧光分子检测自噬流 | 第31页 |
| 10 自噬体和溶酶体融合的检测 | 第31页 |
| 11 溶酶体pH测定 | 第31-32页 |
| 12 数据分析 | 第32-33页 |
| 第一部分 PFOS致小鼠ES细胞衍生心肌细胞自噬流抑制 | 第33-45页 |
| 1 实验结果 | 第33-42页 |
| 1.1 PFOS对小鼠ES细胞分化心肌细胞的影响 | 第33-35页 |
| 1.1.1 PFOS降低小鼠ES心肌细胞分化率 | 第33-34页 |
| 1.1.2 PFOS对分化d 5+5时间点细胞超微结构的影响 | 第34-35页 |
| 1.2 自噬在小鼠ES细胞心肌分化过程中的变化 | 第35-36页 |
| 1.3 PFOS对自噬相关蛋白表达的影响 | 第36-37页 |
| 1.4 PFOS对细胞内自噬流的影响 | 第37-39页 |
| 1.5 PFOS对线粒体自噬的影响 | 第39-40页 |
| 1.6 PFOS减少ES细胞心肌分化过程中线粒体生物生成 | 第40-41页 |
| 1.7 PFOS引起ES-CMs线粒体功能受损 | 第41-42页 |
| 2 讨论 | 第42-44页 |
| 3 小结 | 第44-45页 |
| 第二部分 PFOS致ESC-CMs自噬-溶酶体通路受阻相关机制研究 | 第45-52页 |
| 1 实验结果 | 第45-50页 |
| 1.1 PFOS抑制自噬体和溶酶体的融合 | 第45-46页 |
| 1.2 PFOS对溶酶体的影响 | 第46-47页 |
| 1.2.1 PFOS影响溶酶体的酸化 | 第46-47页 |
| 1.2.2 PFOS不引起溶酶体膜通透化 | 第47页 |
| 1.3 PFOS经由自噬-溶酶体通路引起自噬流抑制 | 第47-49页 |
| 1.4 PFOS致自噬流抑制引起ESC-CMs线粒体损伤和心肌分化减少 | 第49-50页 |
| 2 讨论 | 第50-51页 |
| 3 小结 | 第51-52页 |
| 总结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 综述 | 第59-73页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 作者简历及在读期间所取得研究成果 | 第73页 |
