| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 综述 | 第13-31页 |
| 1.1 主要组织相容性复合体MHC的研究概况 | 第13-29页 |
| 1.1.1 MHC起源简介 | 第13-14页 |
| 1.1.2 MHC的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.3 MHCⅠ类和MHC Ⅱ类分子的结构特征 | 第15-20页 |
| 1.1.4 MHC分子的生物学功能 | 第20-25页 |
| 1.1.5 MHC分子的生物学特性 | 第25-27页 |
| 1.1.6 MHC分子的进化机制 | 第27-29页 |
| 1.1.7 鱼类MHC分子的表达研究进展 | 第29页 |
| 1.2 本研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 2 卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因克隆及序列结构分析 | 第31-46页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 材料与方法 | 第31-39页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第31页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.3 常用溶液配制 | 第32页 |
| 2.2.4 主要仪器设备 | 第32-33页 |
| 2.2.5 引物设计 | 第33-34页 |
| 2.2.6 总RNA提取 | 第34页 |
| 2.2.7 cDNA第一链合成 | 第34-35页 |
| 2.2.8 PCR扩增中间片段 | 第35-36页 |
| 2.2.9 RACE扩增 | 第36-37页 |
| 2.2.10 PCR扩增片段回收、连接转化及测序 | 第37-39页 |
| 2.2.11 生物信息学分析 | 第39页 |
| 2.3 结果与分析 | 第39-44页 |
| 2.3.1 总RNA提取 | 第39页 |
| 2.3.2 Trov-MHC Ⅰα全长序列分析 | 第39-40页 |
| 2.3.3 Trov-MHC Ⅰα氨基酸序列结构分析及蛋白结构功能预测 | 第40-42页 |
| 2.3.4 Trov-MHC Ⅰα蛋白二级结构预测 | 第42-43页 |
| 2.3.5 Trov-MHC Ⅰα与其他物种的同源性分析及系统发育树构建 | 第43-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-46页 |
| 3 卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因多态性及进化机制分析 | 第46-58页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 材料与方法 | 第46-48页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第46页 |
| 3.2.2 试验主要试剂 | 第46页 |
| 3.2.3 常用溶液配制 | 第46页 |
| 3.2.4 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 3.2.5 总RNA提取 | 第47页 |
| 3.2.6 cDNA第一链合成 | 第47页 |
| 3.2.7 PCR扩增ORF框 | 第47页 |
| 3.2.8 PCR扩增片段回收、连接转化及测序 | 第47页 |
| 3.2.9 数据分析 | 第47-48页 |
| 3.3 结果与分析 | 第48-56页 |
| 3.3.1 总RNA提取 | 第48页 |
| 3.3.2 卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因的ORF框扩增 | 第48-49页 |
| 3.3.3 卵形鲳鲹Trov-MHC Ⅰα基因的等位基因特征 | 第49-50页 |
| 3.3.4 卵形鲳鲹Trov-MHC Ⅰα等位基因的分布特征 | 第50页 |
| 3.3.5 卵形鲳鲹Trov-MHC Ⅰα等位基因的多态性位点变异分析 | 第50-52页 |
| 3.3.6 卵形鲳鲹Trov-MHC Ⅰα的选择压力分析 | 第52页 |
| 3.3.7 卵形鲳鲹Trov-MHC Ⅰα的正选择位点预测 | 第52-55页 |
| 3.3.8 卵形鲳鲹Trov-MHC Ⅰα等位基因的系统发育分析 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 4 卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因组织表达特异性分析 | 第58-66页 |
| 4.1 引言 | 第58页 |
| 4.2 材料与方法 | 第58-61页 |
| 4.2.1 实验动物 | 第58页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第58-59页 |
| 4.2.3 常用溶液配制 | 第59页 |
| 4.2.4 主要仪器设备 | 第59页 |
| 4.2.5 健康卵形鲳鲹各个组织的取材 | 第59页 |
| 4.2.6 LPS和poly I:C刺激后卵形鲳鲹组织的取材 | 第59页 |
| 4.2.7 引物设计 | 第59-60页 |
| 4.2.8 总RNA提取 | 第60页 |
| 4.2.9 cDNA第一链合成 | 第60页 |
| 4.2.10 实时荧光定量PCR (qRT-PCR)扩增 | 第60页 |
| 4.2.11 数据分析 | 第60-61页 |
| 4.3 结果与分析 | 第61-64页 |
| 4.3.1 卵形鲳鲹各个组织总RNA提取 | 第61页 |
| 4.3.2 目的基因和内参基因的融解曲线 | 第61-62页 |
| 4.3.3 健康卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因的组织特异性表达分布分析 | 第62-63页 |
| 4.3.4 LPS或poly I:C刺激后卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因的组织表达变化分析 | 第63-64页 |
| 4.4 讨论 | 第64-66页 |
| 5 卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因的原核表达及分析研究 | 第66-85页 |
| 5.1 引言 | 第66页 |
| 5.2 材料与方法 | 第66-77页 |
| 5.2.1 实验动物 | 第66页 |
| 5.2.2 质粒和菌株 | 第66页 |
| 5.2.3 主要酶及试剂 | 第66-67页 |
| 5.2.4 常用溶液配制 | 第67-69页 |
| 5.2.5 常用仪器设备 | 第69页 |
| 5.2.6 引物设计 | 第69-70页 |
| 5.2.7 总RNA提取 | 第70页 |
| 5.2.8 cDNA第一链合成 | 第70页 |
| 5.2.9 PCR扩增 | 第70页 |
| 5.2.10 PCR扩增片段回收、连接转化及测序 | 第70-71页 |
| 5.2.11 质粒抽提 | 第71页 |
| 5.2.12 质粒酶切 | 第71-72页 |
| 5.2.13 原核表达载体的构建、转化与鉴定 | 第72页 |
| 5.2.14 重组融合蛋白的诱导表达 | 第72-73页 |
| 5.2.15 SDS-PAGE检测 | 第73页 |
| 5.2.16 重组融合蛋白的可溶性鉴定 | 第73-74页 |
| 5.2.17 重组融合蛋白的大量诱导表达与纯化 | 第74-75页 |
| 5.2.18 纯化蛋白浓度的测定 | 第75页 |
| 5.2.19 多克隆抗体的制备 | 第75-76页 |
| 5.2.20 卵形鲳鲹不同组织全蛋白样品的制备 | 第76-77页 |
| 5.2.21 Western blot检测卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因在不同组织中的表达 | 第77页 |
| 5.3 结果与分析 | 第77-83页 |
| 5.3.1 卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因目的片段扩增及酶切鉴定 | 第77-78页 |
| 5.3.2 卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因原核表达质粒的鉴定 | 第78-79页 |
| 5.3.3 重组蛋白的诱导表达 | 第79页 |
| 5.3.4 重组蛋白的可溶性鉴定 | 第79-80页 |
| 5.3.5 重组蛋白的纯化 | 第80-81页 |
| 5.3.6 重组蛋白的浓度 | 第81页 |
| 5.3.7 制备的多克隆抗体的效价检测 | 第81页 |
| 5.3.8 制备的多克隆抗体的免疫印迹检测 | 第81-82页 |
| 5.3.9 卵形鲳鲹各个组织中全蛋白提取及检测 | 第82页 |
| 5.3.10 免疫印迹检测卵形鲳鲹MHC Ⅰα基因在各组织中的表达 | 第82-83页 |
| 5.4 讨论 | 第83-85页 |
| 6 卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因克隆及序列结构分析 | 第85-100页 |
| 6.1 引言 | 第85页 |
| 6.2 材料与方法 | 第85-88页 |
| 6.2.1 实验动物 | 第85页 |
| 6.2.2 主要试剂 | 第85页 |
| 6.2.3 常用溶液配制 | 第85页 |
| 6.2.4 主要仪器设备 | 第85页 |
| 6.2.5 引物设计 | 第85-86页 |
| 6.2.6 总RNA提取 | 第86页 |
| 6.2.7 基因组DNA提取 | 第86-87页 |
| 6.2.8 cDNA第一链合成 | 第87页 |
| 6.2.9 PCR扩增中间片段 | 第87页 |
| 6.2.10 RACE扩增 | 第87页 |
| 6.2.11 卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因组序列扩增 | 第87-88页 |
| 6.2.12 PCR扩增片段回收、连接转化及测序 | 第88页 |
| 6.2.13 生物信息学分析 | 第88页 |
| 6.3 结果与分析 | 第88-98页 |
| 6.3.1 总RNA和基因组DNA提取 | 第88-89页 |
| 6.3.2 卵形鲳鲹MHC Ⅱα基因序列结构分析 | 第89-93页 |
| 6.3.3 卵形鲳鲹MHC Ⅱβ基因序列结构分析 | 第93-98页 |
| 6.4 讨论 | 第98-100页 |
| 7 卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因多态性及进化机制分析 | 第100-122页 |
| 7.1 引言 | 第100页 |
| 7.2 材料与方法 | 第100-101页 |
| 7.2.1 实验动物 | 第100页 |
| 7.2.2 主要试剂 | 第100页 |
| 7.2.3 常用溶液配制 | 第100页 |
| 7.2.4 主要仪器设备 | 第100页 |
| 7.2.5 总RNA提取 | 第100页 |
| 7.2.6 cDNA第一链合成 | 第100-101页 |
| 7.2.7 PCR扩增ORF框 | 第101页 |
| 7.2.8 PCR扩增片段回收、连接转化及测序 | 第101页 |
| 7.2.9 数据分析 | 第101页 |
| 7.3 结果与分析 | 第101-120页 |
| 7.3.1 总RNA提取 | 第101页 |
| 7.3.2 卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因的ORF框扩增 | 第101-102页 |
| 7.3.3 卵形鲳鲹Trov-MHC Ⅱα基因的多态性与进化机制分析 | 第102-111页 |
| 7.3.4 卵形鲳鲹Trov-MHC Ⅱβ基因的多态性与进化机制分析 | 第111-120页 |
| 7.4 讨论 | 第120-122页 |
| 8 卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因组织表达特异性分析 | 第122-129页 |
| 8.1 引言 | 第122页 |
| 8.2 材料与方法 | 第122-123页 |
| 8.2.1 实验动物 | 第122页 |
| 8.2.2 实验主要试剂 | 第122页 |
| 8.2.3 常用溶液配制 | 第122页 |
| 8.2.4 主要仪器设备 | 第122页 |
| 8.2.5 健康卵形鲳鲹各个组织的取材 | 第122页 |
| 8.2.6 LPS和poly I:C刺激后卵形鲳鲹组织的取材 | 第122页 |
| 8.2.7 引物设计 | 第122-123页 |
| 8.2.8 总RNA提取 | 第123页 |
| 8.2.9 cDNA第一链合成 | 第123页 |
| 8.2.10 qRT-PCR扩增 | 第123页 |
| 8.2.11 数据分析 | 第123页 |
| 8.3 结果与分析 | 第123-128页 |
| 8.3.1 卵形鲳鲹各个组织总RNA提取 | 第123页 |
| 8.3.2 目的基因和内参基因的融解曲线 | 第123-124页 |
| 8.3.3 健康卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因的组织特异性表达分布分析 | 第124-126页 |
| 8.3.4 LPS或poly I:C刺激后卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因的组织表达变化分析 | 第126-128页 |
| 8.4 讨论 | 第128-129页 |
| 9 卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因的原核表达及分析研究 | 第129-140页 |
| 9.1 引言 | 第129页 |
| 9.2 材料与方法 | 第129-131页 |
| 9.2.1 实验材料 | 第129页 |
| 9.2.2 引物设计 | 第129页 |
| 9.2.3 总RNA提取 | 第129-130页 |
| 9.2.4 cDNA第一链合成 | 第130页 |
| 9.2.5 PCR扩增 | 第130页 |
| 9.2.6 PCR扩增片段回收、连接转化及测序 | 第130页 |
| 9.2.7 质粒抽提 | 第130页 |
| 9.2.8 质粒酶切 | 第130页 |
| 9.2.9 原核表达载体的构建、转化与鉴定 | 第130页 |
| 9.2.10 重组融合蛋白的诱导表达 | 第130-131页 |
| 9.2.11 SDS-PAGE检测 | 第131页 |
| 9.2.12 重组融合蛋白的可溶性鉴定 | 第131页 |
| 9.2.13 重组融合蛋白的大量诱导表达与纯化 | 第131页 |
| 9.2.14 纯化蛋白浓度的测定 | 第131页 |
| 9.2.15 多克隆抗体的制备 | 第131页 |
| 9.2.16 卵形鲳鲹不同组织全蛋白样品的制备 | 第131页 |
| 9.2.17 Western blot检测卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因在不同组织中的表达 | 第131页 |
| 9.3 结果与分析 | 第131-137页 |
| 9.3.1 卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因目的片段扩增及酶切鉴定 | 第131-132页 |
| 9.3.2 卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因原核表达质粒的鉴定 | 第132页 |
| 9.3.3 重组蛋白的诱导表达 | 第132-133页 |
| 9.3.4 重组蛋白的可溶性鉴定 | 第133-134页 |
| 9.3.5 重组蛋白的纯化 | 第134-135页 |
| 9.3.6 重组蛋白的浓度 | 第135页 |
| 9.3.7 制备的多克隆抗体的效价 | 第135页 |
| 9.3.8 制备的多克隆抗体的免疫印迹检测 | 第135-136页 |
| 9.3.9 卵形鲳鲹各个组织中全蛋白提取及检测 | 第136页 |
| 9.3.10 免疫印迹检测卵形鲳鲹MHC Ⅱ类基因在各组织中的表达 | 第136-137页 |
| 9.4 讨论 | 第137-140页 |
| 10 全文总结和创新点 | 第140-142页 |
| 10.1 全文总结 | 第140-141页 |
| 10.2 创新点 | 第141-142页 |
| 参考文献 | 第142-155页 |
| 缩略词 | 第155-157页 |
| 作者攻读学位期间主要研究成果 | 第157-158页 |
| 致谢 | 第158页 |
