| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-15页 |
| 1.1 乳酸菌概述 | 第10页 |
| 1.2 基因编辑技术概述 | 第10页 |
| 1.3 CRISPR/Cas系统概述 | 第10-12页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas系统组成及分类 | 第11页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas系统作用机制及应用 | 第11页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9 系统在乳酸菌中的应用 | 第11-12页 |
| 1.4 乳酸菌的转化方法 | 第12页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第12-13页 |
| 1.6 技术路线 | 第13-15页 |
| 2 载体构建 | 第15-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.2 试剂及仪器设备 | 第16页 |
| 2.1.3 培养基及溶液 | 第16-17页 |
| 2.1.4 引物 | 第17-18页 |
| 2.2 试验方法 | 第18-22页 |
| 2.2.1 质粒pLCNICK的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 质粒pLP-gba的提取 | 第19页 |
| 2.2.3 质粒A的构建 | 第19-21页 |
| 2.2.4 质粒B的构建 | 第21页 |
| 2.2.5 质粒C的构建 | 第21-22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-31页 |
| 2.3.1 pLCNICK质粒 | 第22页 |
| 2.3.2 质粒A的构建结果 | 第22-27页 |
| 2.3.3 质粒B的构建结果 | 第27-29页 |
| 2.3.4 质粒C的构建结果 | 第29-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31页 |
| 2.5 小结 | 第31-33页 |
| 3 类植物乳杆菌电转化条件的优化 | 第33-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 菌种及质粒 | 第33页 |
| 3.1.2 试剂及仪器设备 | 第33页 |
| 3.1.3 培养基及溶液 | 第33-34页 |
| 3.1.4 引物 | 第34页 |
| 3.2 方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 生长曲线的测定 | 第34页 |
| 3.2.2 大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒pMG36e的制备 | 第34-35页 |
| 3.2.3 感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 3.2.4 电转化 | 第35页 |
| 3.2.5 转化子的筛选及验证 | 第35-36页 |
| 3.2.6 转化效率的计算 | 第36页 |
| 3.2.7 电转化条件的优化 | 第36-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-44页 |
| 3.3.1 生长曲线的测定 | 第38-39页 |
| 3.3.2 大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒pMG36e | 第39页 |
| 3.3.3 电转化条件的优化 | 第39-43页 |
| 3.3.4 转化子的验证 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-46页 |
| 4 结论与展望 | 第46-48页 |
| 4.1 结论 | 第46页 |
| 4.1.1 载体构建 | 第46页 |
| 4.1.2 类植物乳杆菌电转化条件的优化 | 第46页 |
| 4.2 展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 后记 | 第57-58页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第58页 |
