| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 新城疫研究进展 | 第14-17页 |
| 1.1.1 病原学 | 第14页 |
| 1.1.2 NDV主要免疫原性蛋白研究 | 第14-16页 |
| 1.1.3 新城疫基因工程疫苗的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 鸡传染性支气管炎研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 病原学 | 第17页 |
| 1.2.2 IBV主要免疫原性蛋白研究 | 第17-18页 |
| 1.2.3 鸡传染性支气管炎基因工程疫苗的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3 干酪乳杆菌作为抗原呈递载体的研究进展 | 第19-25页 |
| 1.3.1 干酪乳杆菌的耐受能力 | 第19-20页 |
| 1.3.2 干酪乳杆菌诱发的机体免疫 | 第20-21页 |
| 1.3.3 干酪乳杆菌作为表达载体的应用 | 第21-25页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 2 部分NDV F、IBV S1 原核表达载体构建及蛋白纯化 | 第26-44页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 病毒、质粒、菌株、商品疫苗 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-33页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第27-28页 |
| 2.2.2 NDV LaSota病毒、IBV H120 病毒液增殖 | 第28页 |
| 2.2.3 NDV LaSota病毒、IBV H120 病毒RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.4 RT-PCR扩增目的基因 | 第28-29页 |
| 2.2.5 重组质粒pMD18-T-F、pMD18-T-S1 的构建与鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2.6 重组原核表达载体构建与鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.7 目的基因于大肠杆菌的蛋白表达 | 第32-33页 |
| 2.2.8 重组蛋白的纯化 | 第33页 |
| 2.2.9 抗血清的制备 | 第33页 |
| 2.2.10 重组蛋白的Western blotting鉴定 | 第33页 |
| 2.3 结果 | 第33-41页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增结果 | 第33-34页 |
| 2.3.2 重组质粒pMD18-T-F、pMD18-T-S1 鉴定 | 第34-36页 |
| 2.3.3 重组质粒pET-32a-F、pET-32a-S1 鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3.4 目的蛋白最佳诱导条件的确定 | 第37-40页 |
| 2.3.5 蛋白可溶性鉴定 | 第40页 |
| 2.3.6 Western blotting鉴定结果 | 第40-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-44页 |
| 3 串联表达NDV F、IBV S1 二联重组干酪乳杆菌的构建 | 第44-60页 |
| 3.1 材料 | 第44-45页 |
| 3.1.1 菌株、质粒 | 第44页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 3.2 方法 | 第45-52页 |
| 3.2.1 重组质粒pLA-F的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.2 重组质粒pLA-F-S1 的构建与鉴定 | 第46-50页 |
| 3.2.3 重组干酪乳杆菌pLA-F-S1/L.casei的构建 | 第50-52页 |
| 3.3 结果 | 第52-57页 |
| 3.3.1 IBV S1 基因的鉴定结果 | 第52-53页 |
| 3.3.2 重组质粒pLA-F-S1 鉴定结果 | 第53-54页 |
| 3.3.3 pLA-F-S1/L.casei鉴定结果 | 第54-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-60页 |
| 4 pLA-F-S1/L.casei的免疫原性分析 | 第60-72页 |
| 4.1 材料 | 第60-61页 |
| 4.1.1 菌株、毒株、实验动物 | 第60页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第60-61页 |
| 4.2 方法 | 第61-64页 |
| 4.2.1 免疫用重组干酪乳杆菌菌悬液的制备 | 第61页 |
| 4.2.2 试验动物分组 | 第61-62页 |
| 4.2.3 样品的采集 | 第62页 |
| 4.2.4 免疫效果评价 | 第62-63页 |
| 4.2.5 攻毒保护性试验 | 第63-64页 |
| 4.3 结果 | 第64-69页 |
| 4.3.1 血清中抗NDV、IBV特异性IgG检测 | 第64-65页 |
| 4.3.2 肠道、肺脏、鼻腔洗液中sIgA效价检测 | 第65-67页 |
| 4.3.3 脾脏T淋巴细胞增殖检测结果 | 第67页 |
| 4.3.4 攻毒保护性试验结果 | 第67-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-72页 |
| 5 结论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-86页 |
| 附录 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 个人简历 | 第90页 |
