| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1.1 鸡传染性法氏囊病 | 第14-17页 |
| 1.1.1 概述 | 第14页 |
| 1.1.2 我国vvIBDV的流行趋势 | 第14-15页 |
| 1.1.3 IBDV的基因组和编码蛋白 | 第15-16页 |
| 1.1.4 我国IBD防控情况 | 第16-17页 |
| 1.2 马立克氏病 | 第17-19页 |
| 1.2.1 概述 | 第17页 |
| 1.2.2 MDV的毒力进化及流行情况 | 第17-18页 |
| 1.2.3 MDV的基因组结构 | 第18-19页 |
| 1.2.4 我国MD防控情况 | 第19页 |
| 1.3 重组MDV活载体疫苗研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 我国vvIBDV流行毒株的遗传变异、抗原性和致病性分析 | 第21-28页 |
| 2.1 材料和方法 | 第21-23页 |
| 2.1.1 病毒及细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 IBDV分离株的遗传进化分析 | 第22页 |
| 2.1.4 IBDV分离株的抗原性分析 | 第22页 |
| 2.1.5 IBDV分离株的鸡胚半数感染量测定 | 第22-23页 |
| 2.1.6 IBDV分离株的致病性分析 | 第23页 |
| 2.2 结果 | 第23-26页 |
| 2.2.1 我国vvIBDV分离株的遗传进化分析 | 第23-24页 |
| 2.2.2 我国vvIBDV分离株的抗原性分析 | 第24页 |
| 2.2.3 我国vvIBDV分离株的致病性分析 | 第24-26页 |
| 2.3 讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 MDV多片段Fosmid粘粒拯救系统的建立 | 第28-35页 |
| 3.1 材料和方法 | 第28-30页 |
| 3.1.1 病毒及细胞 | 第28页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第28页 |
| 3.1.3 MDV培养及病毒基因组的提取 | 第28-29页 |
| 3.1.4 MDV基因组DNA的末端修饰 | 第29页 |
| 3.1.5 连接和包装 | 第29页 |
| 3.1.6 重组粘粒的鉴定和测序 | 第29页 |
| 3.1.7 亲本疫苗株病毒的拯救 | 第29-30页 |
| 3.1.8 拯救病毒的鉴定 | 第30页 |
| 3.1.9 拯救毒rMDV和原MDV疫苗株病毒生长曲线的测定 | 第30页 |
| 3.2 结果 | 第30-33页 |
| 3.2.1 MDV病毒基因组Fosmid文库的构建 | 第30-31页 |
| 3.2.2 用于病毒拯救的重组粘粒的选择 | 第31页 |
| 3.2.3 拯救毒rMDV的鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2.4 拯救毒rMDV与原MDV疫苗株病毒生长曲线的比较 | 第32-33页 |
| 3.3 讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 MDV基因组外源基因插入位点的筛选 | 第35-44页 |
| 4.1 材料和方法 | 第35-38页 |
| 4.1.1 病毒及细胞 | 第35页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第35页 |
| 4.1.3 带有Kan-ccdB抗性基因表达框架的重组突变粘粒的构建 | 第35-36页 |
| 4.1.4 pENTR1-eGFP的构建 | 第36-37页 |
| 4.1.5 含有eGFP表达框架的重组突变粘粒的构建 | 第37页 |
| 4.1.6 重组病毒的拯救 | 第37页 |
| 4.1.7 重组病毒的鉴定 | 第37页 |
| 4.1.8 重组病毒的eGFP表达情况 | 第37-38页 |
| 4.1.9 重组病毒的生长曲线滴定 | 第38页 |
| 4.1.10 重组病毒的遗传稳定性检测 | 第38页 |
| 4.2 结果 | 第38-42页 |
| 4.2.1 重组病毒的拯救 | 第38页 |
| 4.2.2 重组病毒的鉴定 | 第38-40页 |
| 4.2.3 重组病毒的eGFP表达水平的比较 | 第40-41页 |
| 4.2.4 重组病毒体外复制特性 | 第41页 |
| 4.2.5 重组病毒的遗传稳定性 | 第41-42页 |
| 4.3 讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 表达IBDV VP2基因的重组MDV的构建及鉴定 | 第44-58页 |
| 5.1 材料和方法 | 第44-48页 |
| 5.1.1 病毒及细胞 | 第44页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第44-45页 |
| 5.1.3 pCAGGS-VP2表达质粒的构建 | 第45页 |
| 5.1.4 VP2入门质粒pENT1-VP2的构建 | 第45页 |
| 5.1.5 含有VP2表达框架的重组突变粘粒的构建 | 第45页 |
| 5.1.6 重组病毒的拯救 | 第45页 |
| 5.1.7 重组病毒的鉴定 | 第45-46页 |
| 5.1.8 重组病毒目的基因VP2表达情况 | 第46页 |
| 5.1.9 重组病毒的遗传稳定性 | 第46页 |
| 5.1.10 重组病毒的复制特性 | 第46页 |
| 5.1.11 重组病毒对vvIBDV的免疫保护试验 | 第46-47页 |
| 5.1.12 重组病毒对vvMDV的免疫保护试验 | 第47-48页 |
| 5.2 结果 | 第48-56页 |
| 5.2.1 插入VP2基因的重组粘粒的构建 | 第48页 |
| 5.2.2 重组病毒的鉴定 | 第48-49页 |
| 5.2.3 目的基因VP2表达情况 | 第49-50页 |
| 5.2.4 重组病毒的遗传稳定性 | 第50-51页 |
| 5.2.5 重组病毒的复制特性 | 第51-52页 |
| 5.2.6 重组病毒免疫SPF鸡后IBDV抗体滴度的检测 | 第52-53页 |
| 5.2.7 重组病毒对vvIBDV攻毒的免疫保护效果 | 第53-54页 |
| 5.2.8 重组病毒对vvMDV攻毒的免疫保护效果 | 第54-56页 |
| 5.3 讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 表达IBDV VP2基因的重组MDV活载体疫苗的免疫效力评价 | 第58-76页 |
| 6.1 材料和方法 | 第58-61页 |
| 6.1.1 病毒及细胞 | 第58页 |
| 6.1.2 主要试剂及试验用鸡 | 第58页 |
| 6.1.3 rMDV-VP2疫苗最小免疫剂量的确定 | 第58-59页 |
| 6.1.4 rMDV-VP2疫苗的效力试验及与商品化疫苗的比较 | 第59页 |
| 6.1.5 rMDV-VP2疫苗对不同vvIBDV分离株的交叉保护试验 | 第59-60页 |
| 6.1.6 母源抗体对rMDV-VP2疫苗免疫效果的影响 | 第60页 |
| 6.1.7 rMDV-VP2疫苗免疫持续期试验 | 第60页 |
| 6.1.8 rMDV-VP2疫苗对不同品种商品蛋鸡的免疫效力试验 | 第60-61页 |
| 6.2 结果 | 第61-74页 |
| 6.2.1 rMDV-VP2疫苗最小免疫剂量的确定 | 第61-64页 |
| 6.2.2 rMDV-VP2疫苗效力试验及与IBD商品化疫苗的比较 | 第64-67页 |
| 6.2.3 rMDV-VP2疫苗对不同vvIBDV分离株的交叉保护试验 | 第67-68页 |
| 6.2.4 rMDV-VP2疫苗的母源抗体干扰试验 | 第68-70页 |
| 6.2.5 rMDV-VP2疫苗免疫持续期试验 | 第70-72页 |
| 6.2.6 rMDV-VP2疫苗对不同品种商品蛋鸡的免疫效力试验 | 第72-74页 |
| 6.3 讨论 | 第74-76页 |
| 第七章 表达IBDV VP2基因的重组MDV活载体疫苗的安全性评价 | 第76-91页 |
| 7.1 材料和方法 | 第76-79页 |
| 7.1.1 病毒及细胞 | 第76页 |
| 7.1.2 实验动物 | 第76页 |
| 7.1.3 主要试剂 | 第76页 |
| 7.1.4 主要检测方法 | 第76-77页 |
| 7.1.5 rMDV-VP2疫苗单剂量接种的安全性试验 | 第77页 |
| 7.1.6 rMDV-VP2疫苗单剂量重复接种的安全性试验 | 第77-78页 |
| 7.1.7 rMDV-VP2疫苗大剂量接种的安全性试验 | 第78页 |
| 7.1.8 rMDV-VP2疫苗用于非靶动物后的临床反应 | 第78页 |
| 7.1.9 rMDV-VP2疫苗在黑龙江省的环境释放试验 | 第78-79页 |
| 7.2 结果 | 第79-89页 |
| 7.2.1 rMDV-VP2疫苗单剂量接种的安全性试验 | 第79-81页 |
| 7.2.2 rMDV-VP2疫苗单剂量重复接种对鸡的安全性分析 | 第81-83页 |
| 7.2.3 rMDV-VP2疫苗大剂量接种对鸡的安全性分析 | 第83-84页 |
| 7.2.4 rMDV-VP2疫苗接种非靶动物小鼠后的临床反应 | 第84-85页 |
| 7.2.5 rMDV-VP2疫苗的水平传播能力 | 第85-86页 |
| 7.2.6 rMDV-VP2疫苗的垂直传播能力 | 第86页 |
| 7.2.7 rMDV-VP2疫苗在鸡体内的存留情况 | 第86-87页 |
| 7.2.8 rMDV-VP2疫苗免疫鸡后的排毒情况 | 第87-88页 |
| 7.2.9 rMDV-VP2疫苗在应用环境中的存活能力 | 第88-89页 |
| 7.3 讨论 | 第89-91页 |
| 全文结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-98页 |
| 博士后期间其他工作内容 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 作者简介 | 第100-102页 |
| 博士后期间论文发表情况 | 第102页 |
