| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 海藻糖的功能性研究概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 海藻糖的性质和功能 | 第11-12页 |
| 1.1.2 海藻糖的应用 | 第12-13页 |
| 1.2 人体肠道益生菌研究现状与进展 | 第13-14页 |
| 1.2.1 人体肠道菌群的分类及作用 | 第13-14页 |
| 1.2.2 人体肠道益生菌的生理特性 | 第14页 |
| 1.2.3 益生菌对肠道菌群的作用 | 第14页 |
| 1.3 肠道益生菌抗逆性机制的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.3.1 常见益生菌抗逆性机制阐述 | 第14-16页 |
| 1.3.2 嗜酸乳杆菌的耐酸机制 | 第16页 |
| 1.3.3 嗜酸乳杆菌与胃肠道环境的相互作用 | 第16-17页 |
| 1.3.4 益生菌活菌数测定方法 | 第17-18页 |
| 1.4 海藻糖与人体肠道益生菌相互作用研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4.1 海藻糖相关作用机理阐述 | 第18-19页 |
| 1.4.2 体内外实验模拟人体胃肠环境 | 第19页 |
| 1.5 乳酸菌高效表达基因的研究 | 第19-20页 |
| 1.6 重叠延伸PCR技术用于基因敲除 | 第20-21页 |
| 1.7 选题依据和目的意义 | 第21页 |
| 1.8 本课题的研究内容 | 第21-23页 |
| 第2章 海藻糖对多种肠道益生菌的生长影响 | 第23-41页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第23-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第24-26页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.4 培养基 | 第27页 |
| 2.3 分析方法 | 第27页 |
| 2.4 实验方法 | 第27-29页 |
| 2.4.1 菌种活化 | 第27页 |
| 2.4.2 菌悬液的制备及生长检测 | 第27页 |
| 2.4.3 高效液相色谱HPLC分析 | 第27-28页 |
| 2.4.4 HPLC-MS液相色谱-质谱联用分析 | 第28页 |
| 2.4.5 SDS-PAGE益生菌菌体蛋白分析 | 第28页 |
| 2.4.6 AKTA蛋白纯化 | 第28-29页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第29-39页 |
| 2.5.1 多种肠道益生菌生长曲线 | 第29-30页 |
| 2.5.2 多种肠道益生菌代谢检测 | 第30-39页 |
| 2.5.3 菌体蛋白分子筛纯化分析 | 第39页 |
| 2.6 本章小结 | 第39-41页 |
| 第3章 海藻糖对嗜酸乳杆菌体内体外的作用研究 | 第41-59页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第41-43页 |
| 3.2.1 实验菌种 | 第41页 |
| 3.2.2 实验动物 | 第41-42页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第42页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.5 培养基 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-48页 |
| 3.3.1 SEM扫描电镜观察 | 第43页 |
| 3.3.2 嗜酸乳杆菌耐酸存活率检测 | 第43-45页 |
| 3.3.3 嗜酸乳杆菌耐胆盐存活率检测 | 第45-46页 |
| 3.3.4 动物实验血糖分析 | 第46-47页 |
| 3.3.5 动物实验嗜酸乳杆菌体内存活率 | 第47-48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-56页 |
| 3.4.1 菌体扫描电镜观察 | 第48-49页 |
| 3.4.2 海藻糖作用下嗜酸乳杆菌耐酸存活分析 | 第49-52页 |
| 3.4.3 海藻糖作用下嗜酸乳杆菌耐胆盐存活分析 | 第52-55页 |
| 3.4.4 动物实验血糖变化 | 第55-56页 |
| 3.4.5 动物实验体内益生菌存活率 | 第56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-59页 |
| 第4章 嗜酸乳杆菌(Lactobacillus.acidophilus NCFM)gadC基因缺失工程菌的构建及海藻糖作用性能研究 | 第59-73页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第59-61页 |
| 4.2.1 实验菌种 | 第59页 |
| 4.2.2 引物设计 | 第59-60页 |
| 4.2.3 实验试剂及分子试剂盒 | 第60页 |
| 4.2.4 实验仪器与设备 | 第60页 |
| 4.2.5 实验用具的处理及培养基、试剂配制 | 第60-61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-68页 |
| 4.3.1 L.acidophilus NCFM基因组DNA的提取 | 第61-62页 |
| 4.3.2 pHT01质粒的提取 | 第62-63页 |
| 4.3.3 扩增同源臂gadC1和抗性标记基因Cm~r | 第63-64页 |
| 4.3.4 利用重叠PCR技术扩增重叠敲除片段gadC-Cm~r | 第64-66页 |
| 4.3.5 回收重叠敲除片段的酶切及浓缩 | 第66页 |
| 4.3.6 电转化感受态细胞的制备 | 第66-67页 |
| 4.3.7 gadC-Cm~r敲除片段的电转化及阳性重组菌株鉴定 | 第67页 |
| 4.3.8 原始菌株和重组菌株耐酸性检测 | 第67-68页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第68-71页 |
| 4.4.1 L.acidophilus NCFM基因组DNA的提取结果 | 第68页 |
| 4.4.2 pHT01质粒的提取结果 | 第68-69页 |
| 4.4.3 同源臂gadC1及抗性基因Cm~r的获取 | 第69页 |
| 4.4.4 重叠敲除片段gadC-Cm~r的获取 | 第69-70页 |
| 4.4.5 敲除片段gadC-Cm~r的电转化及阳性重组菌株鉴定结果 | 第70-71页 |
| 4.4.6 原始菌株L.acidophilus NCFM和重组菌株L.acidophilus NCFMΔgadC的耐酸性检测 | 第71页 |
| 4.5 本章小结 | 第71-73页 |
| 第5章 嗜酸乳杆菌(L.acidophilus NCFM)gadC基因回补/过表达工程菌的构建及海藻糖作用性能研究 | 第73-85页 |
| 5.1 引言 | 第73页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第73-74页 |
| 5.2.1 实验菌种 | 第73页 |
| 5.2.2 引物设计 | 第73-74页 |
| 5.2.3 实验试剂及分子试剂盒 | 第74页 |
| 5.2.4 实验仪器与设备 | 第74页 |
| 5.2.5 实验用具的处理及培养基、试剂配制 | 第74页 |
| 5.3 实验方法 | 第74-79页 |
| 5.3.1 L.acidophilus NCFM和L.acidophilus NCFMΔgadC基因组DNA的提取 | 第74-75页 |
| 5.3.2 L.acidophilus NCFM和L.acidophilus NCFMΔgadC基因验证 | 第75-76页 |
| 5.3.3 pMG36e质粒的提取 | 第76-77页 |
| 5.3.4 完整表达目的基因gadC的获取 | 第77页 |
| 5.3.5 质粒和目的基因双酶切及浓缩 | 第77-78页 |
| 5.3.6 无缝克隆构建pMG36e-gadC重组载体 | 第78-79页 |
| 5.3.7 电转化L.acidophilus NCFM和L.acidophilus NCFMΔgadC感受态细胞的制备 | 第79页 |
| 5.3.8 pMG36e-gadC重组载体的电转化及阳性重组菌株鉴定 | 第79页 |
| 5.3.9 L.acidophilus NCFM关于gadC基因回补菌株/过表达工程菌耐酸性检测 | 第79页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第79-84页 |
| 5.4.1 L.acidophilus NCFM和L.acidophilus NCFMΔgadC基因验证结果 | 第79-81页 |
| 5.4.2 pMG36e质粒的提取结果 | 第81页 |
| 5.4.3 完整表达gadC基因的获取结果 | 第81-82页 |
| 5.4.4 无缝克隆构建pMG36e-gadC重组表达质粒验证结果 | 第82-83页 |
| 5.4.5 pMG36e-gadC重组载体的电转化及阳性重组菌株鉴定 | 第83页 |
| 5.4.6 L.acidophilus NCFM关于gadC基因回补菌株/过表达工程菌耐酸性检测 | 第83-84页 |
| 5.5 本章小结 | 第84-85页 |
| 第6章 总结与展望 | 第85-87页 |
| 6.1 总结 | 第85-86页 |
| 6.2 展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 硕士期间主要科研成果 | 第97页 |
