| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| 1.1 百合抗寒研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 植物GPAT基因研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 GPAT基因在植物抗寒性中的作用 | 第16-17页 |
| 1.2.2 GPAT基因在植物其他抗逆中的作用 | 第17页 |
| 1.2.3 GPAT基因与含油量的关系 | 第17-18页 |
| 1.2.4 GPAT与植物育性 | 第18页 |
| 1.3 植物启动子概述 | 第18-19页 |
| 1.3.1 高等植物启动子的概念 | 第18页 |
| 1.3.2 真核植物启动子结构概述 | 第18-19页 |
| 1.4 启动子类型 | 第19-22页 |
| 1.4.1 组成型启动子 | 第19页 |
| 1.4.2 组织特异性启动子 | 第19-21页 |
| 1.4.3 诱导型启动子 | 第21-22页 |
| 1.5 实时荧光定量PCR技术原理及其应用 | 第22-23页 |
| 1.5.1 实时荧光定量PCR技术的原理 | 第22页 |
| 1.5.2 实时荧光定量PCR技术的种类 | 第22-23页 |
| 1.5.3 实时荧光定量PCR技术的应用 | 第23页 |
| 1.6 PCR方法克隆启动子 | 第23-24页 |
| 1.6.1 融合引物巢式PCR | 第23-24页 |
| 1.6.2 热不对称PCR | 第24页 |
| 1.6.3 常规PCR | 第24页 |
| 1.7 启动子功能检测 | 第24-26页 |
| 1.7.1 启动子上蛋白结合位点的验证方法 | 第24-25页 |
| 1.7.2 启动子活性分析 | 第25页 |
| 1.7.3 其他方法 | 第25-26页 |
| 1.8 本试验的研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 第二章 百合GPAT基因的生物信息学分析 | 第27-33页 |
| 2.1 材料和方法 | 第27页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第27页 |
| 2.1.2 实验工具 | 第27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.2.1 两种百合GPAT序列比较及蛋白质结构域分析 | 第27-29页 |
| 2.2.2 两种百合GPAT蛋白的疏水性和跨膜分析 | 第29-30页 |
| 2.2.3 两种百合GPAT蛋白的信号肽分析预测 | 第30页 |
| 2.2.5 两种百合GPAT基因启动子的结构分析 | 第30-31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 外源ABA处理下百合GPAT基因表达 | 第33-40页 |
| 3.1 实验材料及用品 | 第33-34页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第33页 |
| 3.1.2 药品及仪器 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 植物材料的处理 | 第34页 |
| 3.2.2 RNA的提取 | 第34页 |
| 3.2.3 反转录合成cDNA | 第34页 |
| 3.2.4 所用引物设计及内参引物的检测 | 第34-35页 |
| 3.2.5 反转录cDNA的检测 | 第35页 |
| 3.2.6 实时荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.3.1 RNA质量检测 | 第36页 |
| 3.3.2 荧光定量引物的检测 | 第36-37页 |
| 3.3.3 反转录cDNA的检测 | 第37页 |
| 3.3.4 实时荧光定量数据结果及分析 | 第37-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 毛百合GPAT基因启动子缺失融合载体的构建 | 第40-47页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 菌株与克隆载体 | 第40页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第40-41页 |
| 4.1.3 常用培养基的配置方法 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 克隆毛百合GPAT基因启动子缺失片段 | 第41-43页 |
| 4.2.2 重组表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-46页 |
| 4.3.1 毛百合GPAT基因启动子5′端缺失片段的克隆 | 第44-45页 |
| 4.3.2 pMD18-T-GPAT(1~4)重组质粒和表达载体PCAMBIA1303的酶切结果 | 第45页 |
| 4.3.3 重组表达载体的构建及检测 | 第45-46页 |
| 4.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 GPAT基因启动子瞬时表达分析 | 第47-52页 |
| 5.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第47页 |
| 5.1.2 菌株与表达载体 | 第47页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第47-48页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第48页 |
| 5.2 实验方法 | 第48-49页 |
| 5.2.1 烟草土培苗的培养 | 第48页 |
| 5.2.2 工程菌的构建 | 第48页 |
| 5.2.3 注射叶片法侵染烟草 | 第48页 |
| 5.2.4 组织化学染色 | 第48-49页 |
| 5.3 结果与分析 | 第49-51页 |
| 5.3.1 植物表达载体转化农杆菌 | 第49页 |
| 5.3.2 GUS报告基因瞬时表达结果分析 | 第49-51页 |
| 5.4 讨论 | 第51-52页 |
| 第六章 结论 | 第52-54页 |
| 6.1 两种百合GPAT基因的生物信息学分析 | 第52页 |
| 6.2 ABA诱导百合GPAT基因实时荧光定量表达分析 | 第52页 |
| 6.3 GUS报告基因瞬时表达分析 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第66-67页 |
