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百合甘油-3-磷酸酰基转移酶基因结构预测及启动子活性研究

摘要第11-13页
Abstract第13-14页
第一章 文献综述第15-27页
    1.1 百合抗寒研究进展第15-16页
    1.2 植物GPAT基因研究进展第16-18页
        1.2.1 GPAT基因在植物抗寒性中的作用第16-17页
        1.2.2 GPAT基因在植物其他抗逆中的作用第17页
        1.2.3 GPAT基因与含油量的关系第17-18页
        1.2.4 GPAT与植物育性第18页
    1.3 植物启动子概述第18-19页
        1.3.1 高等植物启动子的概念第18页
        1.3.2 真核植物启动子结构概述第18-19页
    1.4 启动子类型第19-22页
        1.4.1 组成型启动子第19页
        1.4.2 组织特异性启动子第19-21页
        1.4.3 诱导型启动子第21-22页
    1.5 实时荧光定量PCR技术原理及其应用第22-23页
        1.5.1 实时荧光定量PCR技术的原理第22页
        1.5.2 实时荧光定量PCR技术的种类第22-23页
        1.5.3 实时荧光定量PCR技术的应用第23页
    1.6 PCR方法克隆启动子第23-24页
        1.6.1 融合引物巢式PCR第23-24页
        1.6.2 热不对称PCR第24页
        1.6.3 常规PCR第24页
    1.7 启动子功能检测第24-26页
        1.7.1 启动子上蛋白结合位点的验证方法第24-25页
        1.7.2 启动子活性分析第25页
        1.7.3 其他方法第25-26页
    1.8 本试验的研究目的及意义第26-27页
第二章 百合GPAT基因的生物信息学分析第27-33页
    2.1 材料和方法第27页
        2.1.1 实验材料第27页
        2.1.2 实验工具第27页
    2.2 结果与分析第27-31页
        2.2.1 两种百合GPAT序列比较及蛋白质结构域分析第27-29页
        2.2.2 两种百合GPAT蛋白的疏水性和跨膜分析第29-30页
        2.2.3 两种百合GPAT蛋白的信号肽分析预测第30页
        2.2.5 两种百合GPAT基因启动子的结构分析第30-31页
    2.3 讨论第31-33页
第三章 外源ABA处理下百合GPAT基因表达第33-40页
    3.1 实验材料及用品第33-34页
        3.1.1 植物材料第33页
        3.1.2 药品及仪器第33-34页
    3.2 实验方法第34-36页
        3.2.1 植物材料的处理第34页
        3.2.2 RNA的提取第34页
        3.2.3 反转录合成cDNA第34页
        3.2.4 所用引物设计及内参引物的检测第34-35页
        3.2.5 反转录cDNA的检测第35页
        3.2.6 实时荧光定量PCR第35-36页
    3.3 结果与分析第36-39页
        3.3.1 RNA质量检测第36页
        3.3.2 荧光定量引物的检测第36-37页
        3.3.3 反转录cDNA的检测第37页
        3.3.4 实时荧光定量数据结果及分析第37-39页
    3.4 讨论第39-40页
第四章 毛百合GPAT基因启动子缺失融合载体的构建第40-47页
    4.1 实验材料第40-41页
        4.1.1 菌株与克隆载体第40页
        4.1.2 实验试剂第40-41页
        4.1.3 常用培养基的配置方法第41页
    4.2 实验方法第41-44页
        4.2.1 克隆毛百合GPAT基因启动子缺失片段第41-43页
        4.2.2 重组表达载体的构建第43-44页
    4.3 结果与分析第44-46页
        4.3.1 毛百合GPAT基因启动子5′端缺失片段的克隆第44-45页
        4.3.2 pMD18-T-GPAT(1~4)重组质粒和表达载体PCAMBIA1303的酶切结果第45页
        4.3.3 重组表达载体的构建及检测第45-46页
    4.4 讨论第46-47页
第五章 GPAT基因启动子瞬时表达分析第47-52页
    5.1 实验材料第47-48页
        5.1.1 植物材料第47页
        5.1.2 菌株与表达载体第47页
        5.1.3 实验试剂第47-48页
        5.1.4 主要仪器第48页
    5.2 实验方法第48-49页
        5.2.1 烟草土培苗的培养第48页
        5.2.2 工程菌的构建第48页
        5.2.3 注射叶片法侵染烟草第48页
        5.2.4 组织化学染色第48-49页
    5.3 结果与分析第49-51页
        5.3.1 植物表达载体转化农杆菌第49页
        5.3.2 GUS报告基因瞬时表达结果分析第49-51页
    5.4 讨论第51-52页
第六章 结论第52-54页
    6.1 两种百合GPAT基因的生物信息学分析第52页
    6.2 ABA诱导百合GPAT基因实时荧光定量表达分析第52页
    6.3 GUS报告基因瞬时表达分析第52-54页
参考文献第54-65页
致谢第65-66页
攻读硕士学位期间发表文章第66-67页

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