| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1 前言 | 第15-16页 |
| 2 病菌的生物学特性 | 第16-18页 |
| ·分类地位及菌系分化 | 第16-17页 |
| ·病原物特征 | 第17页 |
| ·病菌的寄主范围和抗性研究 | 第17-18页 |
| ·病原菌致病症状 | 第18页 |
| 3 柑橘溃疡病的检测方法 | 第18-23页 |
| ·常规检测方法 | 第18-19页 |
| ·症状识别法 | 第19页 |
| ·病原菌分离培养及致病性测定法 | 第19页 |
| ·噬菌体检验法 | 第19-20页 |
| ·血清学检测技术 | 第20-21页 |
| ·酶联免疫吸附法(ELISA) | 第20-21页 |
| ·胶体金免疫层析方法 | 第21页 |
| ·分子杂交检测法 | 第21页 |
| ·PCR检测方法 | 第21-22页 |
| ·DNA指纹图谱分析 | 第22页 |
| ·脂肪酸甲脂光谱分析诊断法 | 第22-23页 |
| ·激光检测法 | 第23页 |
| ·滚环扩增检测技术(Rolling circle amplification,RCA) | 第23页 |
| 4 环媒恒温基因扩增技术(LAMP)及其研究进展 | 第23-27页 |
| ·环媒恒温基因扩增技术原理 | 第23-26页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·LAMP技术扩增机制 | 第24-26页 |
| ·LAMP技术的特点 | 第26-27页 |
| ·LAMP技术研究进展 | 第27页 |
| ·LAMP技术研究方向 | 第27页 |
| ·LAMP技术应用领域分布 | 第27页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 第二章 柑橘溃疡病菌的分离培养与致病性鉴定 | 第29-36页 |
| 1 材料与方法 | 第29-31页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·病菌来源 | 第29页 |
| ·主要试剂及配制 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-31页 |
| ·病原菌的分离培养 | 第30页 |
| ·革兰氏染色法 | 第30页 |
| ·致病性测定 | 第30-31页 |
| ·柑橘溃疡病菌生长速度的测定 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-34页 |
| ·形态与染色特性 | 第31-32页 |
| ·致病性测定 | 第32-33页 |
| ·柑橘溃疡病菌生长速度测定 | 第33-34页 |
| 3 讨论与小结 | 第34-36页 |
| 第三章 ELISA法检测柑橘溃疡病菌 | 第36-45页 |
| 1 材料与方法 | 第36-40页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·菌种 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·主要设备仪器 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-38页 |
| ·抗原的制备 | 第37页 |
| ·大鼠免疫 | 第37页 |
| ·抗Xac IgG的收集纯化 | 第37-38页 |
| ·间接ELISA法操作步骤 | 第38页 |
| ·ELISA法检测柑橘溃疡病菌最佳条件的确定 | 第38-39页 |
| ·抗原最适包被浓度的确定 | 第38页 |
| ·封闭时间的确定 | 第38-39页 |
| ·抗体最适浓度的确定 | 第39页 |
| ·抗体最佳作用时间的确定 | 第39页 |
| ·酶标抗体最适浓度的确定 | 第39页 |
| ·酶标抗体最佳作用时间的确定 | 第39页 |
| ·底物最佳作用时间的确定 | 第39页 |
| ·ELISA灵敏度检测 | 第39页 |
| ·ELISA特异性检测 | 第39-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-43页 |
| ·免疫效果 | 第40页 |
| ·抗原最适包被浓度的确定 | 第40页 |
| ·封闭时间的确定 | 第40-41页 |
| ·抗体最佳作用时间的确定 | 第41页 |
| ·酶标抗体最适浓度的确定 | 第41-42页 |
| ·酶标抗体最佳作用时间的确定 | 第42页 |
| ·底物最佳作用时间的确定 | 第42页 |
| ·ELISA灵敏度检测 | 第42-43页 |
| ·ELISA特异性检测 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4 结论 | 第44-45页 |
| 第四章 PCR法检测柑橘溃疡病菌 | 第45-54页 |
| 1 材料与方法 | 第45-47页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·实验菌株 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| ·引物合成 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-47页 |
| ·细菌DNA模板的制备 | 第46页 |
| ·PCR反应条件的优化 | 第46页 |
| ·PCR特异性试验 | 第46页 |
| ·PCR敏感性试验 | 第46页 |
| ·PCR实际检测 | 第46-47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-52页 |
| ·PCR条件的确立 | 第47-49页 |
| ·引物浓度 | 第47页 |
| ·Taq酶浓度 | 第47-48页 |
| ·dNTPs浓度 | 第48-49页 |
| ·退火温度 | 第49页 |
| ·标准株检测实验 | 第49-50页 |
| ·PCR特异性试验 | 第50-51页 |
| ·PCR敏感性试验 | 第51-52页 |
| ·PCR实际检测应用 | 第52页 |
| 3 讨论与结论 | 第52-54页 |
| 第五章 柑橘溃疡病菌LAMP法的建立 | 第54-67页 |
| 1 材料与方法 | 第54-57页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·实验菌株 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·细菌DNA模板的提取 | 第55页 |
| ·环媒恒温基因扩增技术(LAMP)引物设计 | 第55-56页 |
| ·LAMP反应 | 第56页 |
| ·LAMP特异性试验 | 第56页 |
| ·LAMP灵敏性试验 | 第56页 |
| ·LAMP实际检测应用 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-64页 |
| ·LAMP检测法的建立和条件的确定 | 第57-60页 |
| ·MgSO4浓度 | 第57页 |
| ·dNTPs浓度 | 第57-58页 |
| ·甜菜碱浓度 | 第58-59页 |
| ·反应温度 | 第59-60页 |
| ·反应时间 | 第60页 |
| ·LAMP反应体系的确立 | 第60-62页 |
| ·LAMP特异性试验 | 第62页 |
| ·LAMP灵敏性试验 | 第62-63页 |
| ·LAMP实际检测应用 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| ·柑橘溃疡病菌LAMP法目的基因的选择与引物设计 | 第64页 |
| ·模板制备 | 第64-65页 |
| ·柑橘溃疡病菌LAMP法的条件优化 | 第65页 |
| ·柑橘溃疡病菌LAMP法的特异性和敏感性 | 第65页 |
| ·LAMP法检测柑橘溃疡病菌的优点 | 第65-66页 |
| ·LAMP法建立的注意事项 | 第66页 |
| 4 小结与展望 | 第66页 |
| 5 本论文创新点及进一步工作 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录A 环媒恒温基因扩增技术文献计量参考文献 | 第73-86页 |
| 附录B 柑橘溃疡病菌AE008923.1基因 | 第86-89页 |
| 附录C 论文中的重要英文缩写 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-93页 |
| 作者简介 | 第93页 |