| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-32页 |
| 第一章 氨基酸转运蛋白PAT1 | 第12-17页 |
| 1.1 PAT1的发现及其命名 | 第12页 |
| 1.2 PAT1运输的底物 | 第12-13页 |
| 1.3 PAT1的分布 | 第13-14页 |
| 1.4 PAT1蛋白的结构 | 第14-17页 |
| 第二章 mTORC1信号通路 | 第17-27页 |
| 2.1 mTOR信号通路概述 | 第17-18页 |
| 2.2 溶酶体是激活mTORC1信号通路的重要场所 | 第18页 |
| 2.3 影响mTORC1的上游信号 | 第18-19页 |
| 2.4 mTORC1的下游信号通路 | 第19-21页 |
| 2.5 mTORC1通路中氨基酸信号向溶酶体表面的传递 | 第21-25页 |
| 2.5.1 Rag GTP酶介导氨基酸信号的传递 | 第21-22页 |
| 2.5.2 Ragulator复合物介导氨基酸信号的传递 | 第22页 |
| 2.5.3 V-ATP酶介导氨基酸信号的传递 | 第22-23页 |
| 2.5.4 SLC38A9作为溶酶体内精氨酸的传感器 | 第23-24页 |
| 2.5.5 FLCN-FNIP复合物作为RagC/D的CAP发挥作用 | 第24-25页 |
| 2.5.6 FLCN介导亮氨酸信号的传递 | 第25页 |
| 2.6 PAT1参与调控mTORC1 | 第25-27页 |
| 第三章 溶酶体定位信号 | 第27-32页 |
| 3.1 经典的溶酶体跨膜蛋白运输机制 | 第27-29页 |
| 3.2 非经典的溶酶体跨膜蛋白运输机制 | 第29-32页 |
| 3.2.1 非经典的溶酶体跨膜蛋白定位信号 | 第29-30页 |
| 3.2.2 转录后脂质修饰对溶酶体跨膜蛋白运输的影响 | 第30-31页 |
| 3.2.3 蛋白相互作用对溶酶体跨膜蛋白运输的影响 | 第31-32页 |
| 试验研究 | 第32-83页 |
| 第四章 PAT1的氨基末端存在一个YxxΦ类型的溶酶体定位信号 | 第32-56页 |
| 4.1 材料 | 第32-34页 |
| 4.1.1 质粒 | 第32页 |
| 4.1.2 细胞 | 第32页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第32-33页 |
| 4.1.4 主要试剂 | 第33-34页 |
| 4.2 方法 | 第34-38页 |
| 4.2.1 细胞复苏、冻存与培养 | 第34-35页 |
| 4.2.2 细胞转染与稳转细胞系的构建 | 第35页 |
| 4.2.3 细胞饥饿处理与药物或氨基酸的添加 | 第35-36页 |
| 4.2.4 溶酶体蛋白的提取 | 第36页 |
| 4.2.5 细胞膜蛋白的提取 | 第36-37页 |
| 4.2.6 Western blot检测蛋白的表达 | 第37-38页 |
| 4.3 结果 | 第38-54页 |
| 4.3.1 EGFP-PAT1氨基端存在翻译后的剪切 | 第38-41页 |
| 4.3.2 PAT1的剪切可以被EDTA抑制 | 第41-42页 |
| 4.3.3 PAT1的剪切位点为~(47)TTWF~(50) | 第42-45页 |
| 4.3.4 PAT1的剪切具有保守性 | 第45-46页 |
| 4.3.5 PAT1剪切片段中存在一个经典的酪氨酸溶酶体定位信号 | 第46-47页 |
| 4.3.6 Y38A突变影响PAT1抑制mTORC1的活性 | 第47-49页 |
| 4.3.7 ~(38)YQRF~(41)序列影响PAT1在细胞膜上的表达 | 第49-50页 |
| 4.3.8 氨基酸信号可以诱导PAT1进行剪切 | 第50-52页 |
| 4.3.9 氨基酸通过直接与PAT1相互作用诱导其剪切 | 第52-54页 |
| 4.3.10 氨基酸诱导PAT1蛋白在细胞内的分布模型 | 第54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 PAT1蛋白细胞内定位信号的研究 | 第56-73页 |
| 5.1 材料 | 第56-58页 |
| 5.1.1 质粒 | 第56页 |
| 5.1.2 细胞 | 第56页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第56-57页 |
| 5.1.4 主要试剂 | 第57-58页 |
| 5.2 方法 | 第58-59页 |
| 5.2.1 细胞复苏、冻存与培养 | 第58页 |
| 5.2.2 细胞爬片与转染 | 第58页 |
| 5.2.3 细胞免疫染色 | 第58-59页 |
| 5.2.4 细胞饥饿处理 | 第59页 |
| 5.2.5 Western blot检测蛋白的表达 | 第59页 |
| 5.3 结果 | 第59-71页 |
| 5.3.1 验证myc-PAT1的细胞内定位 | 第59-61页 |
| 5.3.2 PAT1无其它依赖酪氨酸残基的溶酶体定位信号 | 第61-62页 |
| 5.3.3 PAT1第二个细胞质肽段中存在溶酶体定位信号 | 第62-65页 |
| 5.3.4 PAT1突变体对其溶酶体定位的影响 | 第65-68页 |
| 5.3.5 ~(113)FVDY~(116)影响PAT1的溶酶体定位 | 第68页 |
| 5.3.6 ~(113)FVDY~(116)指导PAT1由内质网向高尔基体运输 | 第68-70页 |
| 5.3.7 ~(113)FVDY~(116)所在细胞质肽段可以指导GFP定位到溶酶体 | 第70页 |
| 5.3.8 ~(113)FVDY~(116)影响PAT1抑制mTORC1的功能 | 第70-71页 |
| 5.4 讨论 | 第71-72页 |
| 5.5 小结 | 第72-73页 |
| 第六章 PAT1异位表达对mTORC1信号通路的影响 | 第73-83页 |
| 6.1 材料 | 第73-74页 |
| 6.1.1 质粒 | 第73页 |
| 6.1.2 细胞 | 第73页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第73-74页 |
| 6.1.4 主要试剂 | 第74页 |
| 6.2 方法 | 第74-77页 |
| 6.2.1 myc-PAT1~(mito)和GFP-Bak质粒的构建 | 第74-76页 |
| 6.2.2 细胞的复苏、冻存与培养 | 第76页 |
| 6.2.3 myc-PAT1稳转细胞系的建立 | 第76页 |
| 6.2.4 细胞免疫染色 | 第76页 |
| 6.2.5 细胞饥饿处理 | 第76页 |
| 6.2.6 溶酶体蛋白的提取 | 第76页 |
| 6.2.7 Western blot检测蛋白的表达 | 第76-77页 |
| 6.3 结果 | 第77-81页 |
| 6.3.1 PAT1积聚在溶酶体上抑制mTORC1的活性 | 第77-78页 |
| 6.3.2 将PAT1在线粒体上异位表达 | 第78-80页 |
| 6.3.3 PAT1在线粒体定位不能抑制mTORC1 | 第80-81页 |
| 6.4 讨论 | 第81-82页 |
| 6.5 小结 | 第82-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 创新点 | 第84-85页 |
| 下一步研究计划 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 英文缩写词汇表 | 第98-100页 |
| 附录 | 第100-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 作者简介 | 第105页 |
