| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-34页 |
| 1 课题的提出 | 第15-16页 |
| 2 柑橘中生物类黄酮研究进展 | 第16-32页 |
| 2.1 柑橘中生物类黄酮的功能 | 第16-17页 |
| 2.2 柑橘中生物类黄酮的结构和组成 | 第17-26页 |
| 2.3 柑橘中生物类黄酮的代谢与调控 | 第26-32页 |
| 2.3.1 类黄酮前体合成 | 第26-27页 |
| 2.3.2 黄烷酮类代谢合成 | 第27-29页 |
| 2.3.3 黄酮类代谢合成 | 第29页 |
| 2.3.4 黄烷醇、黄酮醇和花青素类代谢合成 | 第29-32页 |
| 3 与前苦味相关类黄酮代谢及调控的研究进展 | 第32-33页 |
| 4 柑橘类黄酮合成与代谢中的研究热点与难点 | 第33-34页 |
| 第二章 甜橙果实中主要类黄酮的组成及代谢分析 | 第34-48页 |
| 1 引言 | 第34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 2.1.2 标准品与试剂 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-37页 |
| 2.2.1 柑橘中类黄酮的提取优化 | 第35-36页 |
| 2.2.2 利用LC-MS进行甜橙中生物类黄酮定性分析 | 第36页 |
| 2.2.3 利用HPLC进行甜橙中生物类黄酮定量分析 | 第36页 |
| 2.2.4 甜橙中Cs1,2RhaT-like的克隆及序列比对分析 | 第36-37页 |
| 2.2.5 标准品添加实验 | 第37页 |
| 2.2.6 数据分析 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-47页 |
| 3.1 LC-MS结合标准品添加实验进行甜橙中类黄酮的组成性分析 | 第37-41页 |
| 3.2 甜橙果实各组织中类黄酮代谢分析 | 第41-46页 |
| 3.2.1 甜橙果实黄皮层中类黄酮的代谢分析 | 第41-43页 |
| 3.2.2 甜橙果实白皮层中类黄酮的代谢分析 | 第43-44页 |
| 3.2.3 甜橙果实囊衣中类黄酮的代谢分析 | 第44-45页 |
| 3.2.4 甜橙果实汁胞中类黄酮的代谢分析 | 第45-46页 |
| 3.3 Cs1,2RhaT-like与Cm1,2RhaT的核苷酸及推导氨基酸序列比对分析 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 柚皮苷在不同柑橘种质果实中的差异积累与1,2RhaT的序列多态性分析 | 第48-71页 |
| 1 引言 | 第48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第48页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 2.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 2.2.1 基因组DNA的提取、基因克隆及全基因组BLAST分析 | 第48-49页 |
| 2.2.2 类黄酮提取及HPLC定量分析 | 第49页 |
| 2.2.3 LC-MS定性分析 | 第49页 |
| 2.2.4 基因转化BY2烟草悬浮细胞系 | 第49-51页 |
| 2.2.5 底物添加及生物转化实验 | 第51页 |
| 2.2.6 数据分析 | 第51-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-66页 |
| 3.1 1,2RhaT高度同源基因克隆分析及在柑橘基因组中BLAST分析 | 第52-54页 |
| 3.2 柑橘自然群体1,2RhaT基因型及柚皮苷代谢表型分析 | 第54-60页 |
| 3.3 柑橘杂交群体1,2RhaT基因型与柚皮苷积累表型分析 | 第60-63页 |
| 3.4 柑橘种质1,2RhaT基因型与新橙皮苷积累表型分析 | 第63-65页 |
| 3.5 BY2-Cm1,2RhaT和BY2-CmdGlcT-1的功能分析 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-71页 |
| 4.1 不同柑橘种质中新橘皮糖苷类的代谢由不同的基因所决定 | 第66-69页 |
| 4.2 长期人工选择可能导致柑橘中1,2RhaT-like基因在驯化过程中发生功能改变甚至趋于消失 | 第69-71页 |
| 第四章 柑橘中1,2RhaT-like功能蛋白(dGlcT-2)的功能验证 | 第71-94页 |
| 1 引言 | 第71页 |
| 2 材料与方法 | 第71-75页 |
| 2.1 实验材料 | 第71-75页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第71-72页 |
| 2.1.2 标准品与试剂 | 第72-73页 |
| 2.1.3 总RNA的提取及定量表达实验 | 第73页 |
| 2.1.4 CsdGlcT-2和Cm1,2RhaT在BY2烟草悬浮细胞中异源表达 | 第73页 |
| 2.1.5 底物添加和生物转化实验 | 第73页 |
| 2.1.6 dGlcT-2在柑橘基因组数据库中的全基因组BLAST分析 | 第73-74页 |
| 2.1.7 RNA-seq文库构建、Illumina RNA-sequencing以及数据处理 | 第74页 |
| 2.1.8 LC-MS定性分析 | 第74页 |
| 2.1.9 HPLC定量分析 | 第74页 |
| 2.1.10 数据分析 | 第74-75页 |
| 3 结果与分析 | 第75-90页 |
| 3.1 dGlcT-2编码区序列分析以及进化分析 | 第75-78页 |
| 3.2 CsdGlcT-2与Cm1,2RhaT转化BY2烟草悬浮细胞及表型分析 | 第78-79页 |
| 3.3 BY2-CsdGlcT-2催化类黄酮生物转化实验及分析 | 第79-82页 |
| 3.3.1 催化类黄酮糖苷配基类生物转化实验及分析 | 第79-80页 |
| 3.3.2 催化类黄酮单-葡萄糖苷类生物转化实验及分析 | 第80-82页 |
| 3.4 dGlcT-2对黄烷酮、黄酮以及黄酮醇底物催化能力分析 | 第82页 |
| 3.5 BY2-CsdGlcT-2和BY2-Cm1,2RhaT功能性对比 | 第82-84页 |
| 3.6 dGlcT-2在柑橘基因组中BLAST分析及在柑橘种质中的克隆分析 | 第84-86页 |
| 3.7 甜橙和柚种质中黄烷酮糖苷类代谢相关基因的RNA-seq分析 | 第86-88页 |
| 3.8 柚果实中黄烷酮糖苷类代谢相关基因随果实发育的qRT-PCR分析 | 第88-90页 |
| 4 讨论 | 第90-94页 |
| 4.1 基因转化BY2烟草悬浮细胞结合生物转化实验能有效验证GTs功能 | 第90页 |
| 4.2 柑橘中类黄酮的代谢存在强烈的竞争关系 | 第90-93页 |
| 4.3 dGlcT对于间接改善柚果实的苦味具有重要意义 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-111页 |
| 附录 Ⅰ 引物序列信息 | 第111-112页 |
| 附录 Ⅱ 甜橙(红肉脐橙)各发育期果肉组织FPKM值 | 第112-113页 |
| 附录 Ⅲ 柚(Y1、Y2和Y3)各发育期果肉组织FPKM值 | 第113-115页 |
| 附录 Ⅳ 攻博期间发表文章及获得奖励 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116-118页 |
