| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第13-16页 |
| 第一章 Mir-148a在神经胶质瘤细胞系的表达 | 第16-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 1.1.1 细胞系 | 第16页 |
| 1.1.2 主要试剂和耗材 | 第16-17页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第17页 |
| 1.1.4 引物序列 | 第17页 |
| 1.1.5 常用溶液配制 | 第17-18页 |
| 1.2 实验方法 | 第18-20页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第18页 |
| 1.2.2 荧光定量PCR | 第18-20页 |
| 1.2.3 统计学分析 | 第20页 |
| 1.3 结果 | 第20-22页 |
| 1.3.1 正常神经胶质细胞和神经胶质瘤细胞系中mir-148a的表达 | 第20-22页 |
| 1.4 讨论 | 第22-24页 |
| 1.5 小结 | 第24-25页 |
| 第二章 mir-148a靶基因的预测、筛选及验证 | 第25-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂和耗材 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第26页 |
| 2.1.5 常用溶液配制 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 生物信息学预测mir-148a与GADD45之间的关系 | 第27页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第27页 |
| 2.2.3 RNA pull down实验 | 第27-29页 |
| 2.2.4 荧光定量PCR检测GADD45的表达 | 第29页 |
| 2.2.5 Western Blot检测 | 第29-30页 |
| 2.2.6 荧光素酶实验 | 第30-31页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-37页 |
| 2.3.1 生物信息学预测mir-148a与GADD45之间的相关性 | 第31-32页 |
| 2.3.2 RNA pull down对预测靶基因的筛选 | 第32-34页 |
| 2.3.3 GADD45在正常神经胶质细胞和神经胶质瘤细胞系中的表达 | 第34-35页 |
| 2.3.4 荧光素酶活性实验验证GADD45为mir-148a的靶位点 | 第35-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 mir-148a通过靶向调控GADD45促进神经胶质瘤细胞的迁移和侵袭 | 第39-53页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第39页 |
| 3.1.2 质粒 | 第39页 |
| 3.1.3 主要试剂和耗材 | 第39-40页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 3.2.1 细胞培养、荧光定量PCR、Western bloting | 第40页 |
| 3.2.2 GADD45过表达慢病毒表达载体的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.3 GADD45过表达慢病毒包装与滴度测定 | 第41页 |
| 3.2.4 GADD45过表达慢病毒感染神经胶质瘤细胞系 | 第41-42页 |
| 3.2.5 Transwell迁移实验 | 第42页 |
| 3.2.6 Transwell侵袭实验 | 第42页 |
| 3.2.7 划痕实验 | 第42页 |
| 3.2.8 统计学分析 | 第42-43页 |
| 3.3 结果 | 第43-50页 |
| 3.3.1 GADD45过表达慢病毒载体的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.2 GADD45过表达慢病毒滴度测定 | 第44页 |
| 3.3.3 筛选稳定GADD45过表达胶质瘤细胞系 | 第44-45页 |
| 3.3.4 稳转mir-148a过表达和抑制表达神经胶质瘤细胞系中GADD45 mRNA水平的表达情况 | 第45-46页 |
| 3.3.5 稳转mir-148a过表达和抑制表达神经胶质瘤细胞系中GADD45蛋白的表达情况 | 第46-47页 |
| 3.3.6 mir-148a靶向调控GADD45促进神经胶质瘤细胞的迁移与侵袭 | 第47-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-52页 |
| 3.5 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 综述 | 第59-75页 |
| 参考文献 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第77-78页 |
