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硫化氢对小鼠原代肝细胞脂肪合成和分解的影响

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
前言第12-14页
1 材料、试剂和仪器第14-24页
    1.1 实验动物第14页
    1.2 主要试剂第14-16页
    1.3.主要试剂配制第16-21页
        1.3.1 肝脏灌流液(无Ca~(2+)/Mg~(2+) HBSS液,pH 7.4)的配方第16页
        1.3.2 肝组织消化液的配方第16-17页
        1.3.3 胶原酶溶液的配制第17页
        1.3.4 原代肝细胞培养基的配制第17页
        1.3.5 鼠尾胶原工作液的配制第17页
        1.3.6 鼠尾胶原涂抹板的制作第17页
        1.3.7 MTT工作液的配制第17页
        1.3.8 台盼兰溶液的配制第17-18页
        1.3.9 制备肝细胞脂肪变性诱导液第18页
        1.3.10 1×磷酸缓冲盐溶液(PBS)的配制第18页
        1.3.11 1×Tris-Glycine缓冲溶液的配制第18页
        1.3.12 5×蛋白上样缓冲溶液的配制第18-19页
        1.3.13 SDS-PAGE电泳相关溶液的配制第19-21页
        1.3.14 免疫印迹相关溶液配制第21页
    1.4 主要实验仪器第21-24页
2 实验方法与步骤第24-30页
    2.1 小鼠原代肝细胞的获取和培养第24页
    2.2 MTT法检测不同浓度油酸对小鼠原代肝细胞细胞活性的影响第24页
    2.3 实验分组第24-25页
    2.4 油红染色第25页
    2.5 细胞内甘油三酯含量的检测第25页
    2.6 细胞甘油释放量的检测第25-26页
    2.7 BCA法测定蛋白浓度第26页
    2.8 蛋白免疫印记法(WESTERN BLOTTING)检测相关蛋白的表达第26-29页
        2.8.1 蛋白的提取第26-27页
        2.8.2 BCA法测定蛋白浓度第27页
        2.8.3 蛋白浓度的调节第27页
        2.8.4 SDS-PAGE凝胶电泳第27-29页
    2.9 免疫荧光检测细胞内LC3颗粒荧光第29页
    2.10 透射电镜标本的制备第29页
    2.11 统计学分析第29-30页
3 结果第30-38页
    3.1 小鼠原代肝细胞脂肪变性模型建立的条件第30-31页
        3.1.1 MTT法检测细胞活性选择诱导液中油酸的适宜浓度第30页
        3.1.2 油红O染色观察不同浓度油酸对肝细胞脂滴积累情况第30-31页
    3.2 H_2S对肝细胞脂肪合成的影响第31-32页
        3.2.1 H_2S对肝细胞脂滴的影响第31-32页
        3.2.2 H_2S对肝细胞甘油三酯含量的影响第32页
    3.3 H_2S对肝细胞脂肪分解的影响第32-34页
        3.3.1 H_2S对肝细胞甘油释放量的影响第33页
        3.3.2 H_2S对肝细胞质内激素敏感性脂肪酶蛋白表达量的影响第33-34页
    3.4 H_2S对肝细胞自噬的影响第34-38页
        3.4.1 H_2S对肝细胞脂质蓄积和空泡形成的影响第34-35页
        3.4.2 H_2S对肝细胞自噬标志物LC3荧光颗粒的影响第35页
        3.4.3 H_2S对肝细胞LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白表达的影响第35-36页
        3.4.4 H_2S对肝细胞自噬体和自噬溶酶体的影响第36-38页
4 讨论第38-44页
5.结 论第44-46页
参考文献第46-50页
文献综述第50-62页
    参考文献第57-62页
附录第62-64页
致谢第64-66页
硕士期间发表的学术论文第66-67页

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