| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1前言 | 第11-20页 |
| 1.1 关于古菌 | 第11-13页 |
| 1.1.1 古菌的简介 | 第11页 |
| 1.1.2 古菌的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.3 古菌的研究意义及展望 | 第12-13页 |
| 1.2 泉古菌Pyrobaculum calidifontis的来源及特点 | 第13页 |
| 1.3 古嘌苷的发现及其合成过程 | 第13-17页 |
| 1.3.1 古嘌苷和喹啉的生物合成过程 | 第13-15页 |
| 1.3.2 古嘌苷的分布以及ArcS的同源性基因 | 第15-17页 |
| 1.4 QueF-like的酶活性 | 第17-19页 |
| 1.4.1 腈类还原酶活性 | 第17-18页 |
| 1.4.2 脒基转移酶活性 | 第18-19页 |
| 1.5 研究的意义与目的 | 第19-20页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第19页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第19-20页 |
| 2材料与方法 | 第20-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 酶反应底物标准品 | 第20页 |
| 2.1.3 质粒 | 第20页 |
| 2.1.4 主要试剂与试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.6 引物 | 第22页 |
| 2.1.7 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.8 主要溶液 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-37页 |
| 2.2.1 表达载体的构建 | 第25-28页 |
| 2.2.2 诱导表达 | 第28页 |
| 2.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)配方表 | 第28-30页 |
| 2.2.4 QueF-like蛋白的分离纯化与浓缩 | 第30-31页 |
| 2.2.5 蛋白含量的测定 | 第31-32页 |
| 2.2.6 QueF-like蛋白的底物滴定 | 第32页 |
| 2.2.7 QueF-like蛋白的酶活性分析 | 第32-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-57页 |
| 3.1 表达载体的构建 | 第37-42页 |
| 3.1.1 QueF-like基因的扩增 | 第37页 |
| 3.1.2 PCR产物的胶回收 | 第37-38页 |
| 3.1.3 双酶切处理胶回收产物QueF-like基因和pET-28a载体 | 第38-39页 |
| 3.1.4 重组的pET-28a-QueF-like表达载体转化到Trans1-T1感受态细胞中 | 第39页 |
| 3.1.5 菌落PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.6 重组质粒pET-28a-QueF-like的提取 | 第40-41页 |
| 3.1.7 重组质粒的双酶切鉴定 | 第41页 |
| 3.1.8 重组质粒测序 | 第41页 |
| 3.1.9 表达载体转化到BL21(DE3) | 第41-42页 |
| 3.2 目的蛋白诱导表达及纯化 | 第42-45页 |
| 3.2.1 QueF-like蛋白诱导表达 | 第42-43页 |
| 3.2.2 QueF-like蛋白的Ni-NTA纯化 | 第43-44页 |
| 3.2.3 QueF-like蛋白的超滤浓缩 | 第44-45页 |
| 3.3 目的蛋白浓度的测定 | 第45-46页 |
| 3.3.1 绘制蛋白质标准曲线 | 第45-46页 |
| 3.3.2 目的蛋白QueF-like的浓度 | 第46页 |
| 3.4 QueF-like蛋白的底物滴定 | 第46-48页 |
| 3.5 QueF-like蛋白酶活性分析 | 第48-57页 |
| 3.5.1 QueF-like蛋白的腈类还原酶活性的分析 | 第48-52页 |
| 3.5.2 QueF-like蛋白的脒基转移酶活性分析 | 第52-57页 |
| 4讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 重组表达载体的构建 | 第57页 |
| 4.2 外界环境条件对酶活性的影响 | 第57-58页 |
| 4.2.1 温度条件对QueF-like蛋白酶活性的影响 | 第58页 |
| 4.2.2 pH对QueF-like蛋白酶活性的影响 | 第58页 |
| 4.3 QueF-like蛋白的晶体结构与其酶活性的关系 | 第58-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
