| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语 | 第8-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-19页 |
| 1 条纹斑竹鲨 | 第13页 |
| 2 海洋天然产物的抗菌活性研究 | 第13-15页 |
| 2.1 海洋微生物的抗菌活性研究 | 第14页 |
| 2.2 海洋微生物的抗菌代谢产物 | 第14-15页 |
| 3 抗微生物肽 | 第15-17页 |
| 3.1 海洋抗微生物肽的研究与发展 | 第16-17页 |
| 3.2 芽孢杆菌属的抗微生物肽 | 第17页 |
| 4 β-1,3-1,4-葡聚糖酶(bgl) | 第17-19页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第19-21页 |
| 1 研究目的及意义 | 第19页 |
| 2 研究内容 | 第19-20页 |
| 3 实验流程 | 第20-21页 |
| 第三章 条纹斑竹鲨肠道微生物的分离及抑菌活性的初步分析 | 第21-24页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第21页 |
| 1.1 材料 | 第21页 |
| 1.2 试剂 | 第21页 |
| 1.3 菌种 | 第21页 |
| 1.4 培养基配方 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-23页 |
| 2.1 条纹斑竹鲨的饲养 | 第21-22页 |
| 2.2 鲨鱼肠道微生物的分离 | 第22页 |
| 2.2.1 解剖前准备 | 第22页 |
| 2.2.2 肠道解剖 | 第22页 |
| 2.2.3 分离肠道微生物 | 第22页 |
| 2.3 肠道微生物的抑菌活性分析 | 第22-23页 |
| 3 实验结果 | 第23-24页 |
| 第四章 活性菌株GFP-2的分子鉴定 | 第24-28页 |
| 1 实验试剂与仪器 | 第24页 |
| 1.1 试剂 | 第24页 |
| 1.2 仪器 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.1 菌落形态的研究 | 第24页 |
| 2.2 活性菌株GFP-2基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 2.3 PCR扩增GFP-2菌株16SrRNA基因序列 | 第24-25页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.3.2 PCR扩增 | 第25页 |
| 2.3.3 凝胶电泳检测 | 第25页 |
| 2.3.4 测序：切胶纯化测序 | 第25页 |
| 2.4 结果分析 | 第25-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-28页 |
| 3.1 GFP-2菌株的菌落形态 | 第26页 |
| 3.2 GFP-2菌株的16SrRNA基因鉴定结果 | 第26-28页 |
| 第五章 芽孢杆菌GFP-2抗菌代谢产物的初步分离及抑菌活性分析 | 第28-31页 |
| 1 实验方法 | 第28-29页 |
| 1.1 抗菌代谢产物粗蛋白的提取 | 第28页 |
| 1.2 抗菌代谢产物粗蛋白的初步分离 | 第28页 |
| 1.3 抑菌活性分析 | 第28-29页 |
| 2 实验结果 | 第29-31页 |
| 2.1 抗菌代谢产物粗蛋白的抑菌实验结果 | 第29-30页 |
| 2.2 初步分离后的抑菌实验结果 | 第30-31页 |
| 第六章 芽孢杆菌GFP-2基因组的测序及组装分析 | 第31-37页 |
| 1 实验建库 | 第31页 |
| 2 分析流程 | 第31-32页 |
| 2.1 基因组组装 | 第32页 |
| 2.2 基因预测以及功能注释 | 第32页 |
| 2.3 抗微生物肽、次级代谢产物和细菌素预测 | 第32页 |
| 3 分析结果 | 第32-37页 |
| 3.1 芽孢杆菌GFP-2的环形基因组图谱 | 第32-33页 |
| 3.2 基因预测以及功能注释 | 第33-35页 |
| 3.3 抗微生物肽预测 | 第35页 |
| 3.4 次级代谢产物和细菌素预测 | 第35-37页 |
| 第七章 bgl的鉴定和bgl重组酶的制备纯化、抑菌活性分析 | 第37-48页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第37页 |
| 1.1 菌株 | 第37页 |
| 1.2 试剂的配制 | 第37页 |
| 1.3 培养基配方 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-43页 |
| 2.1 bgl的鉴定实验 | 第37-38页 |
| 2.2 bgl重组酶的制备纯化和鉴定 | 第38-43页 |
| 2.2.1 引物的设计和合成 | 第38页 |
| 2.2.2 bgl基因的克隆 | 第38-41页 |
| 2.2.2.1 GFP-2菌株基因组DNA的提取 | 第38页 |
| 2.2.2.2 bgl基因的PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2.2.2.3 琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 | 第39页 |
| 2.2.2.4 目的基因片段的清洁回收 | 第39页 |
| 2.2.2.5 PCR回收产物和表达载体pET-28a(+)的双酶切 | 第39-40页 |
| 2.2.2.6 目的基因与表达载体pET-28a(+)的连接 | 第40页 |
| 2.2.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第40页 |
| 2.2.2.8 连接产物转化E.coilTG1感受态细胞 | 第40-41页 |
| 2.2.2.9 重组质粒的提取 | 第41页 |
| 2.2.2.10 阳性克隆鉴定与测序 | 第41页 |
| 2.2.2.11 重组质粒转化E.coilBL21(DE3)感受态细胞 | 第41页 |
| 2.2.3 bgl重组酶的诱导表达 | 第41-42页 |
| 2.2.4 bgl重组酶的纯化 | 第42页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE电泳 | 第42-43页 |
| 2.2.6 bgl重组酶的鉴定实验 | 第43页 |
| 2.3 bgl重组酶的抑菌活性分析 | 第43页 |
| 3 实验结果 | 第43-48页 |
| 3.1 bgl的鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.2 bgl基因的扩增结果 | 第44页 |
| 3.3 阳性克隆质粒的鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.4 bgl重组酶的SDS-PAGE检测 | 第45-46页 |
| 3.5 bgl重组酶的纯化结果 | 第46页 |
| 3.6 bgl重组酶的鉴定实验结果 | 第46-47页 |
| 3.7 bgl重组酶的抑菌实验结果 | 第47-48页 |
| 第八章 活性菌株GFP-2菌制剂的制备及其虹鳟动物实验 | 第48-50页 |
| 1 实验材料 | 第48页 |
| 2 动物实验设计 | 第48页 |
| 3 生长状态检测 | 第48-49页 |
| 4 实验结果 | 第49页 |
| 5 展望 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
