| 内容提要 | 第1-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 第一节 枯草杆菌蛋白酶 | 第11-15页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶的种类及分布 | 第11页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶的结构及其活性中心 | 第11-15页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶的结构 | 第11-13页 |
| ·枯草杆菌蛋白酶的活性中心及其催化机理 | 第13-15页 |
| 第二节 硒蛋白的生物合成 | 第15-21页 |
| ·硒代半胱氨酸（Sec）的生物合成 | 第15-17页 |
| ·原核生物硒代半胱氨酸的合成 | 第15-16页 |
| ·真核生物硒代半胱氨酸的合成 | 第16-17页 |
| ·硒代半胱氨酸掺入硒蛋白的机制 | 第17-18页 |
| ·原核生物的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS) | 第17页 |
| ·真核生物的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS) | 第17-18页 |
| ·半胱氨酸缺陷型大肠杆菌合成硒蛋白 | 第18-21页 |
| ·营养缺陷型表达体系的来源及发展 | 第18-20页 |
| ·营养缺陷型表达体系的发展 | 第20-21页 |
| ·利用大肠杆菌半胱氨酸营养缺陷型菌株表达硒蛋白 | 第21页 |
| 第三节 包涵体 | 第21-24页 |
| ·包涵体的形成 | 第21-22页 |
| ·包涵体的洗涤溶解 | 第22页 |
| ·包涵体蛋白复性方法 | 第22-24页 |
| 第四节 立论依据 | 第24-27页 |
| 第二章 野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶的合成 | 第27-42页 |
| 第一节 序言 | 第27-28页 |
| 第二节 野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶的表达载体 | 第28-30页 |
| 一、实验材料 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·实验仪器 | 第28页 |
| 二、实验方法 | 第28-30页 |
| ·p-Psub、p-PTsub 质粒的纯化 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳（Agarose gel electrophoresis） | 第29页 |
| ·BL21(DE3)、BL21cys-菌株感受态细胞的制备及质粒的转化 | 第29-30页 |
| 三、实验结果分析 | 第30页 |
| 第三节 野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶的表达、纯化、体外复性和表征 | 第30-42页 |
| 一、实验材料 | 第30-33页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·实验仪器 | 第31页 |
| ·主要溶液的配制 | 第31-33页 |
| ·野生型枯草杆菌蛋白酶表达用培养基 | 第31页 |
| ·硫代枯草杆菌蛋白酶表达用培养基 | 第31-32页 |
| ·硒代枯草杆菌蛋白酶表达用培养基 | 第32页 |
| ·蛋白质提取、纯化、复性用溶液 | 第32页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）主要相关溶液 | 第32-33页 |
| 二、实验方法 | 第33-36页 |
| ·野生型枯草杆菌蛋白酶的表达 | 第33-34页 |
| ·硫代枯草杆菌蛋白酶的表达 | 第34页 |
| ·硒代枯草杆菌蛋白酶的表达 | 第34-35页 |
| ·野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶的分离提纯 | 第35页 |
| ·野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶的体外复性及复性后纯化 | 第35页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第35-36页 |
| ·测定蛋白质浓度 | 第36页 |
| 三、实验结果 | 第36-40页 |
| ·野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶的表达 | 第36-37页 |
| ·野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶的分离提纯 | 第37-38页 |
| ·野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶的体外复性 | 第38-39页 |
| ·野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶复性后纯化 | 第39-40页 |
| 四、讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶的酶学性质及动力学分析 | 第42-50页 |
| 一、实验材料 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| 二、实验方法 | 第42-43页 |
| ·活力的测定 | 第42-43页 |
| ·以TNB 为底物测定硒代枯草杆菌蛋白酶的GPX 活力 | 第42-43页 |
| ·以对硝基苯酚乙酸乙酯为底物测定酶的水解活力 | 第43页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第43页 |
| ·温度Tm 和pH 值对水解酶活力的影响 | 第43页 |
| ·温度Tm 对水解酶活力的影响 | 第43页 |
| ·pH 值对水解酶活力的影响 | 第43页 |
| ·酶的动力学性质研究 | 第43页 |
| 三、结果分析 | 第43-47页 |
| ·以TNB 为底物测定硒代枯草杆菌蛋白酶的GPX 活力 | 第43-44页 |
| ·野生型、硫代、硒代枯草杆菌蛋白酶水解活力的测定 | 第44-45页 |
| ·温度Tm 和pH 值对水解酶活力的影响 | 第45-46页 |
| ·温度Tm 对水解酶活力的影响 | 第45页 |
| ·pH 值对水解酶活力的影响 | 第45-46页 |
| ·酶的动力学性质研究 | 第46-47页 |
| ·酶的饱和动力学研究 | 第46页 |
| ·酶的动力学分析 | 第46-47页 |
| 四、讨论 | 第47-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 摘要 | 第58-60页 |
| ABSTRACT | 第60-62页 |
