| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第14-23页 |
| 第一章 细颈线虫研究概 | 第14-23页 |
| 1.1 羊细颈线虫 | 第14-15页 |
| 1.1.1 分类学地位和种类 | 第14页 |
| 1.1.2 形态学和生活史 | 第14-15页 |
| 1.1.2.1 形态学 | 第14-15页 |
| 1.1.2.2 生活史 | 第15页 |
| 1.2 羊细颈线虫病 | 第15-16页 |
| 1.2.1 流行病学研究 | 第15-16页 |
| 1.2.2 诊断 | 第16页 |
| 1.2.3 防治 | 第16页 |
| 1.3 PCR 技术在寄生虫学研究中的应用 | 第16-18页 |
| 1.3.1 特异性 PCR 方法 | 第16-17页 |
| 1.3.2 聚合酶链式反应连接的限制性片断长度多态性（PCR-RFLP） | 第17页 |
| 1.3.3 长 PCR（Long-range PCR）扩增技术 | 第17-18页 |
| 1.4 细颈线虫分类学和分子遗传学研究 | 第18-22页 |
| 1.4.1 形态学分类研究 | 第18页 |
| 1.4.2 分子生物学分类及遗传学研究 | 第18-22页 |
| 1.4.2.1 核糖体基因特点及在线虫研究中的应用 | 第19-20页 |
| 1.4.2.2 线粒体基因特点及在线虫研究中的应用 | 第20-22页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 试验研究 | 第23-60页 |
| 第二章 细颈线虫的鉴定及 ITS 序列多态性研究 | 第23-35页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-28页 |
| 2.1.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1.1 虫种 | 第23-24页 |
| 2.1.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.1.3 溶液及其配制 | 第24-25页 |
| 2.1.1.4 主要仪器 | 第25页 |
| 2.1.2 方法 | 第25-28页 |
| 2.1.2.1 虫体采集及处理 | 第25页 |
| 2.1.2.2 形态学鉴定 | 第25页 |
| 2.1.2.3 基因组 DNA 提取 | 第25-26页 |
| 2.1.2.4 引物合成 | 第26页 |
| 2.1.2.5 ITS rDNA 序列 PCR 扩增 | 第26-27页 |
| 2.1.2.6 琼脂糖凝胶电泳检测及测序 | 第27页 |
| 2.1.2.7 序列分析及系统进化树重构 | 第27-28页 |
| 2.2 结果 | 第28-33页 |
| 2.2.1 形态学鉴定 | 第28页 |
| 2.2.2 ITS rDNA 序列 PCR 扩增、测序 | 第28页 |
| 2.2.3 细颈线虫 ITS rDNA 序列分析 | 第28-29页 |
| 2.2.4 基于 ITS rDNA 序列的系统进化分析 | 第29-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-34页 |
| 2.4 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 细颈线虫 PCR-RFLP 及特异性 PCR 鉴定方法的建立 | 第35-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第35-38页 |
| 3.1.1 材料 | 第35页 |
| 3.1.1.1 虫种 | 第35页 |
| 3.1.1.2 主要试剂、溶液和仪器 | 第35页 |
| 3.1.2 方法 | 第35-38页 |
| 3.1.2.1 虫体处理、鉴定及 DNA 提取 | 第35页 |
| 3.1.2.2 样品 ITS rDNA 的扩增 | 第35-36页 |
| 3.1.2.3 PCR 限制性片段长度多态性分析方法（PCR-RFLP）的建立 | 第36-37页 |
| 3.1.2.4 奥拉奇细颈线虫特异 PCR 的建立及其特异性试验 | 第37-38页 |
| 3.1.2.5 奥拉奇细颈线虫特异 PCR 敏感性试验 | 第38页 |
| 3.1.2.6 PCR-RFLP 及特异 PCR 方法的应用试验 | 第38页 |
| 3.2 结果 | 第38-41页 |
| 3.2.1 细颈线虫 PCR-RFLP 方法的建立 | 第38-39页 |
| 3.2.2 奥拉奇细颈线虫特异 PCR 方法及特异性试验 | 第39页 |
| 3.2.3 特异性 PCR 敏感性试验 | 第39-40页 |
| 3.2.4 PCR-RFLP 及特异 PCR 方法对不同来源样品的应用试验 | 第40-41页 |
| 3.3 讨论 | 第41页 |
| 3.4 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 细颈线虫线粒体 cox1 基因扩增及遗传进化分析 | 第42-49页 |
| 4.1 材料与方法 | 第42-44页 |
| 4.1.1 材料 | 第42页 |
| 4.1.1.1 虫种 | 第42页 |
| 4.1.1.2 主要试剂、溶液和仪器 | 第42页 |
| 4.1.2 方法 | 第42-44页 |
| 4.1.2.1 样品处理、鉴定及 DNA 提取 | 第42-43页 |
| 4.1.2.2 样品 cox1 基因的扩增 | 第43-44页 |
| 4.1.2.3 序列分析及系统进化树重构 | 第44页 |
| 4.2 结果 | 第44-45页 |
| 4.2.1 细颈线虫 cox1 基因 PCR 扩增结果 | 第44-45页 |
| 4.2.2 细颈线虫 cox1 基因测序及序列分析 | 第45页 |
| 4.2.3 种群系统进化分析 | 第45页 |
| 4.3 讨论 | 第45-46页 |
| 4.4 小结 | 第46-49页 |
| 第五章 奥拉奇细颈线虫和扁刺细颈线虫线粒体基因组序列分析 | 第49-60页 |
| 5.1 材料与方法 | 第49-53页 |
| 5.1.1 材料 | 第49-50页 |
| 5.1.1.1 虫种 | 第49页 |
| 5.1.1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 5.1.1.3 溶液配制 | 第49-50页 |
| 5.1.1.4 主要仪器 | 第50页 |
| 5.1.2 方法 | 第50-53页 |
| 5.1.2.1 样品处理、鉴定及 DNA 提取 | 第50页 |
| 5.1.2.2 长 PCR 引物设计 | 第50页 |
| 5.1.2.3 细颈线虫线粒体基因组长 PCR 扩增方法 | 第50-51页 |
| 5.1.2.4 PCR 产物的回收与纯化 | 第51-52页 |
| 5.1.2.5 纯化 PCR 产物的连接 | 第52页 |
| 5.1.2.6 连接产物的转化 | 第52-53页 |
| 5.1.2.7 转化产物的克隆及菌液 PCR 鉴定 | 第53页 |
| 5.1.2.8 细颈线虫线粒体基因组序列和结构分析 | 第53页 |
| 5.1.2.9 基于线粒体基因组的线虫系统进化树重构 | 第53页 |
| 5.2 结果 | 第53-59页 |
| 5.2.1 细颈线虫线粒体基因组的组成 | 第53-54页 |
| 5.2.2 蛋白质编码基因分析 | 第54页 |
| 5.2.3 基于线粒体基因组的线虫系统进化分析 | 第54-59页 |
| 5.3 讨论 | 第59页 |
| 5.4 小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-87页 |
| 附录 1 三种细颈线虫 ITS rDNA 序列比对 | 第68-75页 |
| 1.1 ITS1 rDNA 序列比对 | 第68-71页 |
| 1.2 5.8S rDNA 序列比对 | 第71-72页 |
| 1.3 ITS2 rDNA 序列比对 | 第72-75页 |
| 附录 2 奥拉奇细颈线虫和扁刺细颈线虫 pcox1 序列比对 | 第75-79页 |
| 附录 3 奥拉奇细颈线虫和扁刺细颈线虫线粒体基因组序列 | 第79-87页 |
| 3.1 奥拉奇细颈线虫基因组序列 | 第79-82页 |
| 3.2 扁刺细颈线虫基因组序列 | 第82-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 作者简介 | 第88-89页 |
