| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第12-32页 |
| 1.1 DMRT家族基因的研究进展 | 第12-21页 |
| 1.1.1 DMRT家族的发现 | 第12-13页 |
| 1.1.2 DMRT家族结构特点 | 第13-16页 |
| 1.1.3 DMRT家族成员的介绍和研究进展 | 第16-21页 |
| 1.1.3.1 Dmrt1 | 第16-17页 |
| 1.1.3.2 Dmrt2 | 第17-18页 |
| 1.1.3.3 Dmrt3 | 第18页 |
| 1.1.3.4 Dmrt4 | 第18-19页 |
| 1.1.3.5 Dmrt5 | 第19页 |
| 1.1.3.6 Dmrt6 | 第19页 |
| 1.1.3.7 Dmrt7 | 第19-20页 |
| 1.1.3.8 Dmrt8 | 第20-21页 |
| 1.2 基因克隆和表达分析的方法 | 第21-22页 |
| 1.2.1 基因克隆的方法 | 第21-22页 |
| 1.2.2 基因表达分析的方法 | 第22页 |
| 1.3 DNA甲基化和表达 | 第22-31页 |
| 1.3.1 表观遗传学和DNA甲基化 | 第22-23页 |
| 1.3.2 DNA甲基化的两种类型 | 第23-25页 |
| 1.3.3 DNA甲基化与基因表达 | 第25-26页 |
| 1.3.4 DNA甲基化可抑制基因转录的可能机制 | 第26页 |
| 1.3.5 基因组DNA甲基化的研究方法 | 第26-31页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二章 材料与方法 | 第32-53页 |
| 2.1 材料 | 第32-33页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 2.2 方法 | 第33-53页 |
| 2.2.1 提取RNA | 第33-35页 |
| 2.2.1.1 RNA提取所需试剂及配制方法 | 第33-34页 |
| 2.2.1.2 RNA提取步骤 | 第34页 |
| 2.2.1.3 提取的RNA去除DNA残留 | 第34-35页 |
| 2.2.2 提取基因组DNA | 第35-36页 |
| 2.2.2.1 基因组DNA提取的准备 | 第35页 |
| 2.2.2.2 基因组DNA提取的步骤 | 第35-36页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第36-38页 |
| 2.2.3.1 引物设计原则 | 第36-37页 |
| 2.2.3.2 简并引物的设计 | 第37页 |
| 2.2.3.3 其他PCR引物设计 | 第37-38页 |
| 2.2.4 DM保守序列的获得 | 第38-41页 |
| 2.2.4.1 鲫鱼逆转录cDNA的克隆和简并PCR | 第38-39页 |
| 2.2.4.2 PCR产物的胶回收和纯化 | 第39页 |
| 2.2.4.3 制备与转化感受态细胞 | 第39-41页 |
| 2.2.4.4 目的片段的连接 | 第41页 |
| 2.2.5 鲫鱼Dmrt3 cDNA末端的克隆 | 第41-43页 |
| 2.2.5.1 5'-RACE和3'-RACE Ready cDNA的制备 | 第41-42页 |
| 2.2.5.2 5'-和3'-RACE的扩增 | 第42-43页 |
| 2.2.6 半定量和嵌套式RT-PCR分析 | 第43-45页 |
| 2.2.6.1 逆转录cDNA | 第43-44页 |
| 2.2.6.2 半定量和嵌套式RT-PCR | 第44-45页 |
| 2.2.7 Dmrt3上游启动子区的获得和甲基化分析 | 第45-52页 |
| 2.2.7.1 上游启动子区的获得 | 第45-48页 |
| 2.2.7.2 甲基化分析 | 第48-49页 |
| 2.2.7.3 亚硫酸氢盐转换测序分析 | 第49-52页 |
| 2.2.8 假基因的克隆和分析 | 第52-53页 |
| 第三章 实验结果 | 第53-67页 |
| 3.1 鲫鱼Dmrt3 cDNA的克隆 | 第53-59页 |
| 3.1.1 Dmrt3保守序列的克隆 | 第53-54页 |
| 3.1.2 鲫鱼Dmrt3 cDNA 3'端和5'端的克隆 | 第54-55页 |
| 3.1.3 鲫鱼Dmrt3 cDNA全序列拼接和蛋白结构的预测分析 | 第55-57页 |
| 3.1.4 鲫鱼Dmrt3假基因的克隆和分析 | 第57-59页 |
| 3.2 不同物种Dmrt3序列比对及进化树的构建 | 第59-61页 |
| 3.2.1 不同物种Dmrt3核苷酸和氨基酸序列比对 | 第59页 |
| 3.2.2 Dmrt基因家族进化树的构建 | 第59-61页 |
| 3.3 鲫鱼Dmrt3基因的表达分析 | 第61-63页 |
| 3.3.1 鲫鱼Dmrt3基因在早期各个发育时期 | 第61-62页 |
| 3.3.2 鲫鱼Dmrt3基因在各个组织中的表达情况 | 第62-63页 |
| 3.4 鲫鱼Dmrt3启动区的甲基化分析 | 第63-67页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第67-70页 |
| 4.1 本研究的主要结果 | 第67-68页 |
| 4.2 DMRT3与其他DMRT家族成员的进化关系 | 第68页 |
| 4.3 鲫鱼Dmrt3的表达与在发育过程中的可能功能 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 作者简历 | 第79页 |
