| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 鱼尼丁受体(RyR)及鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 鱼尼丁受体的发展史 | 第12页 |
| 1.1.2 鱼尼丁受体的结构 | 第12-13页 |
| 1.1.3 鱼尼丁受体的类型 | 第13页 |
| 1.1.4 化合物对鱼尼丁受体功能的调节 | 第13-14页 |
| 1.1.5 作用于鱼尼丁受体杀虫剂的研究概况 | 第14-15页 |
| 1.1.5.1 氟虫双酰胺(flubendiamide) | 第14页 |
| 1.1.5.2 氟虫双酰胺的理化性质 | 第14-15页 |
| 1.1.5.3 氟虫双酰胺的毒性 | 第15页 |
| 1.1.6 鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂的作用机制 | 第15页 |
| 1.2 小菜蛾的生物学及其抗药性研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 小菜蛾的生物学及危害 | 第15-16页 |
| 1.2.2 小菜蛾的抗药性现状 | 第16-17页 |
| 1.2.3 小菜蛾的抗药性机理研究 | 第17-18页 |
| 1.3 鱼尼丁受体基因突变频率检测技术 | 第18-20页 |
| 1.3.1 Bi-PASA技术原理 | 第18-19页 |
| 1.3.2 Bi-PASA技术特点及应用 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-34页 |
| 2.1 供试材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 供试昆虫 | 第21页 |
| 2.1.2 供试药剂及化学试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要分子试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.5 试剂及培养基的配制 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 小菜蛾的饲养 | 第24-25页 |
| 2.2.2 氟虫双酰胺对小菜蛾的毒力测定及抗性选育 | 第25页 |
| 2.2.3 交互抗性的测定 | 第25页 |
| 2.2.4 构建种群生命表的方法 | 第25-26页 |
| 2.2.5 抗性现实遗传力(h~2)估算与抗性风险评估 | 第26页 |
| 2.3 PCR及Bi-PASA等方法 | 第26-34页 |
| 2.3.1 小菜蛾RNA提取、逆转录及PCR扩增 | 第26-31页 |
| 2.3.1.1 小菜蛾RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.3.1.2 小菜蛾总RNA的检测 | 第27页 |
| 2.3.1.2.1 小菜蛾总RNA纯度检测—分光光度法 | 第27页 |
| 2.3.1.2.2 小菜蛾总RNA完整性的鉴定—琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| 2.3.1.3 引物的设计 | 第27-28页 |
| 2.3.1.4 小菜蛾第一链cDNA合成 | 第28-29页 |
| 2.3.1.5 PCR扩增 | 第29页 |
| 2.3.1.6 产物纯化、链接转化与测序 | 第29-31页 |
| 2.3.1.6.1 产物的回收与纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.1.6.2 载体连接 | 第30页 |
| 2.3.1.6.3 转化、扩大培养及测序 | 第30-31页 |
| 2.3.1.7 分析软件 | 第31页 |
| 2.3.2 小菜蛾基因突变频率的检测 | 第31-33页 |
| 2.3.2.1 Bi-PASA引物设计 | 第31-32页 |
| 2.3.2.2 小菜蛾基因组DNA提取 | 第32页 |
| 2.3.2.3 Bi-PASA的检测 | 第32-33页 |
| 2.3.3 不同品系小菜蛾对RyR的表达量 | 第33-34页 |
| 2.3.3.1 荧光定量PCR的引物设计 | 第33页 |
| 2.3.3.2 荧光定量PCR | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-46页 |
| 3.1 氟虫双酰胺对三种小菜蛾品系/种群的毒力测定 | 第34页 |
| 3.2 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展规律及交互抗性 | 第34-36页 |
| 3.2.1 氟虫双酰胺对小菜蛾的抗性汰选 | 第34-36页 |
| 3.2.2 小菜蛾氟虫双酰胺抗性品系对其他药剂的交互抗性 | 第36页 |
| 3.3 小菜蛾氟虫双酰胺抗性品系的生物学特性 | 第36-38页 |
| 3.4 小菜蛾抗氟虫双酰胺的抗性现实遗传力和风险评估 | 第38-40页 |
| 3.4.1 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性现实遗传力 | 第38-39页 |
| 3.4.2 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险评估 | 第39-40页 |
| 3.5 小菜蛾鱼尼丁受体基因序列与基因突变频率检测 | 第40-43页 |
| 3.5.1 小菜蛾鱼尼丁受体C-末端的克隆及基因序列比对分析 | 第40页 |
| 3.5.2 小菜蛾RyR基因突变频率检测结果分析 | 第40-43页 |
| 3.6 RyR在不同品系小菜蛾中的表达量 | 第43-46页 |
| 3.6.1 小菜蛾总RNA质量检测(PAGE法) | 第43页 |
| 3.6.2 小菜蛾总RNA纯度和浓度的检测 | 第43页 |
| 3.6.3 荧光定量PCR的特异性和重复性 | 第43-44页 |
| 3.6.4 扩增效率 | 第44-45页 |
| 3.6.5 不同品系小菜蛾RyR基因的表达量 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| 4.1 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展规律 | 第46页 |
| 4.2 抗氟虫双酰胺小菜蛾品系的生物学特性 | 第46-47页 |
| 4.3 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性风险评估 | 第47-48页 |
| 4.4 RyR基因突变频率的检测 | 第48-49页 |
| 4.5 不同品系RyR基因表达量的检测 | 第49页 |
| 4.6 有待继续研究的问题 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 5.1 小菜蛾对氟虫双酰胺的抗性发展规律及风险评估 | 第50页 |
| 5.2 抗氟虫双酰胺小菜蛾的生物适合度 | 第50页 |
| 5.3 抗氟虫双酰胺小菜蛾RyR的基因突变频率 | 第50页 |
| 5.4 不同品系RyR的基因表达量的差异 | 第50-51页 |
| 本文创新之处 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第61页 |
