| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号说明及缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-29页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶 | 第15-22页 |
| 1.1.1 β-葡萄糖苷酶的来源 | 第16页 |
| 1.1.2 β-葡萄糖苷酶的分类 | 第16-17页 |
| 1.1.3 β-葡萄糖苷酶的结构 | 第17-18页 |
| 1.1.4 β-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第18-19页 |
| 1.1.5 β-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第19页 |
| 1.1.6 β-葡萄糖苷酶的底物特异性 | 第19-20页 |
| 1.1.7 β-葡萄糖苷酶的应用 | 第20-22页 |
| 1.2 β-葡萄糖苷酶在木质纤维素酶系调控中的作用 | 第22-24页 |
| 1.3 纤维素酶基因的异源表达 | 第24-27页 |
| 1.3.1 纤维素酶基因在细菌中的异源表达 | 第24-25页 |
| 1.3.2 纤维素酶基因在酿酒酵母中的异源表达 | 第25页 |
| 1.3.3 纤维素酶基因在毕赤酵母中的异源表达 | 第25-26页 |
| 1.3.4 纤维素酶基因在丝状真菌中的异源表达 | 第26-27页 |
| 1.4 本论文的立题依据和研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 胞外β-葡萄糖苷酶基因的克隆及在毕赤酵母中的异源表达 | 第29-45页 |
| 引言 | 第29页 |
| 2.1 材料和方法 | 第29-37页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第29-30页 |
| 2.1.2 培养基和培养方法 | 第30-31页 |
| 2.1.3 常用的储备液及缓冲液 | 第31-32页 |
| 2.1.4 常用的试剂和仪器 | 第32页 |
| 2.1.5 草酸青霉114-2总RNA的提取及cDNA的合成 | 第32-33页 |
| 2.1.6 引物的设计与基因的克隆 | 第33-34页 |
| 2.1.7 重组表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.1.8 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第35-36页 |
| 2.1.9 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备和转化 | 第36页 |
| 2.1.10 重组蛋白的诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.1.11 β-葡萄糖苷酶活性测定 | 第37页 |
| 2.1.12 蛋白浓度的测定和SDS-PAGE分析 | 第37页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第37-44页 |
| 2.2.1 草酸青霉114-2胞外β-葡萄糖苷酶的氨基酸序列分析 | 第37-39页 |
| 2.2.2 β-葡萄糖苷酶基因的克隆 | 第39-40页 |
| 2.2.3 重组表达载体pPIC9K-bgls的构建 | 第40-41页 |
| 2.2.4 重组表达载体pPIC9K-bgls的验证及筛选 | 第41-42页 |
| 2.2.5 重组蛋白在毕赤酵母GS115中成功表达 | 第42-43页 |
| 2.2.6 检测发酵上清液中的β-葡萄糖苷酶活性 | 第43-44页 |
| 2.3 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 重组蛋白的分离纯化及其酶学性质和应用潜能的研究 | 第45-65页 |
| 引言 | 第45-46页 |
| 3.1 材料和方法 | 第46-49页 |
| 3.1.1 菌株 | 第46页 |
| 3.1.2 培养基及培养条件 | 第46页 |
| 3.1.3 常用的储备液及缓冲液 | 第46-47页 |
| 3.1.4 毕赤酵母发酵液胞外蛋白的收集 | 第47页 |
| 3.1.5 重组蛋白的分离纯化 | 第47页 |
| 3.1.6 糖苷选择和酶的底物特异性分析 | 第47-48页 |
| 3.1.7 纤维寡糖的制备 | 第48页 |
| 3.1.8 温度和pH对酶活力的影响 | 第48页 |
| 3.1.9 葡萄糖和乙醇对酶活力的影响 | 第48-49页 |
| 3.1.10 重组蛋白的N-糖基化分析 | 第49页 |
| 3.1.11 滤纸酶活的测定方法 | 第49页 |
| 3.1.12 重组蛋白的添加办法 | 第49页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第49-63页 |
| 3.2.1 分离纯化得到5种重组蛋白 | 第49-50页 |
| 3.2.2 重组蛋白的底物特异性分析 | 第50-52页 |
| 3.2.3 重组蛋白对纤维寡糖的水解能力分析 | 第52-53页 |
| 3.2.4 温度和pH对重组蛋白酶活力的影响 | 第53-57页 |
| 3.2.5 葡萄糖和乙醇对重组蛋白酶活力的影响 | 第57页 |
| 3.2.6 重组蛋白中均存在N-糖基化 | 第57-58页 |
| 3.2.7 N-糖基化对重组蛋白活性及热稳定性的影响 | 第58-60页 |
| 3.2.8 重组蛋白的添加促进高产菌株JU-A10-T发酵液的糖化能力 | 第60-63页 |
| 3.3 本章小结 | 第63-65页 |
| 论文创新性成果与展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-79页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第82页 |
