| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-27页 |
| 1.1 研究植物油脂的意义 | 第12-13页 |
| 1.2 植物油脂合成的生化过程 | 第13-16页 |
| 1.2.1 植物脂肪酸的合成 | 第14-15页 |
| 1.2.2 植物 TAG 的合成 | 第15-16页 |
| 1.2.3 植物油体的合成 | 第16页 |
| 1.3 GPAT 基因研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 植物表达载体构建及遗传转化研究 | 第17-18页 |
| 1.5 植物反义 RNA 技术的研究进展及应用 | 第18-20页 |
| 1.6 植物遗传转化的研究进展 | 第20-24页 |
| 1.6.1 农杆菌介导遗传转化的原理 | 第20-21页 |
| 1.6.2 农杆菌介导遗传转化的特点 | 第21页 |
| 1.6.3 农杆菌介导遗传转化影响因素 | 第21-24页 |
| 1.7 花生转基因技术的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.7.1 基因枪法 | 第24-25页 |
| 1.7.2 农杆菌介导法 | 第25页 |
| 1.7.3 其它转化法 | 第25-26页 |
| 1.8 花生组织培养技术的研究和应用 | 第26页 |
| 1.9 本研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-41页 |
| 2.1 花生 GPAT9 基因过表达载体的构建 | 第27-33页 |
| 2.1.1 试验质粒与菌株 | 第27页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 引物合成 | 第27页 |
| 2.1.4 试验方法 | 第27-33页 |
| 2.1.4.1 质粒 DNA 的提取 | 第27-28页 |
| 2.1.4.2 pEASY-GPAT9 质粒和 PGBVE 质粒的酶切 | 第28页 |
| 2.1.4.3 酶切产物的胶回收 | 第28-29页 |
| 2.1.4.4 目的基因片段和载体大片段 DNA 的连接 | 第29-30页 |
| 2.1.4.5 重组 DNA 转化大肠杆菌 | 第30页 |
| 2.1.4.6 阳性重组子的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.1.4.7 农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.1.4.8 pGBV-GPAT9 质粒转入农杆菌 LBA4404 感受态细胞并筛选鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2 花生过表达 GPAT9 基因的遗传转化试验 | 第33-36页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第33页 |
| 2.2.2 试验菌株 | 第33页 |
| 2.2.3 培养基 | 第33页 |
| 2.2.4 试验方法 | 第33-36页 |
| 2.2.4.1 遗传转化步骤 | 第34页 |
| 2.2.4.2 转基因花生植株的鉴定 | 第34-36页 |
| 2.2.4.3 转基因花生的大田移栽 | 第36页 |
| 2.3 花生 GPAT9 基因反义表达载体的构建 | 第36-40页 |
| 2.3.1 试验质粒与菌株 | 第36-37页 |
| 2.3.2 引物设计及合成 | 第37页 |
| 2.3.3 试验方法 | 第37-40页 |
| 2.3.3.1 目的基因的扩增 | 第37页 |
| 2.3.3.2 目的基因的胶回收 | 第37-38页 |
| 2.3.3.3 目的片段与 pEASY-T1 载体连接并转化大肠杆菌 | 第38-39页 |
| 2.3.3.4 pEASY-RGPAT9 的鉴定和测序 | 第39-40页 |
| 2.3.3.5 质粒 DNA 的提取 | 第40页 |
| 2.3.3.6 双酶切 pEASY-RGPAT9 质粒和 PGBVE 质粒 | 第40页 |
| 2.3.3.7 酶切产物的胶回收 | 第40页 |
| 2.3.3.8 连接目的片段和载体大片段 | 第40页 |
| 2.3.3.9 连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第40页 |
| 2.3.3.10 pGBV-RGPAT9 的鉴定与测序 | 第40页 |
| 2.3.3.11 农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第40页 |
| 2.3.3.12 pGBV-RGPAT9 转入农杆菌 LBA4404 并筛选鉴定 | 第40页 |
| 2.4 花生反义 GPAT9 基因的遗传转化试验 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-49页 |
| 3.1 花生 GPAT9 基因植物过表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.1 目的基因 GPAT9 的制备 | 第41页 |
| 3.1.2 表达载体质粒 PGBVE 大片段 DNA 的制备 | 第41页 |
| 3.1.3 GPAT9 基因与表达载体大片段 DNA 的连接和转化 | 第41页 |
| 3.1.4 PGBV-GPAT9 的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| 3.1.5 PGBV-GPAT9 转入农杆菌 LBA4404 | 第42页 |
| 3.2 过表达花生 GPAT9 基因的遗传转化 | 第42-44页 |
| 3.2.1 GPAT9 基因转化花生及 PPT 抗性苗的获得 | 第42-43页 |
| 3.2.2 抗性苗的 PCR 鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.3 转基因苗的大田移栽 | 第44页 |
| 3.3 花生 GPAT9 基因反义表达载体的构建 | 第44-47页 |
| 3.3.1 目的片段 RGPAT9 的扩增 | 第44页 |
| 3.3.2 目的片段连接于克隆载体 pEASY-T1 并转化大肠杆菌 | 第44页 |
| 3.3.3 目的基因 RGPAT9 的制备 | 第44页 |
| 3.3.4 表达载体质粒 PGBVE 大片段 DNA 的制备 | 第44-45页 |
| 3.3.5 RGPAT9 基因与表达载体大片段 DNA 的连接和转化 | 第45页 |
| 3.3.6 PGBV-RGPAT9 的酶切鉴定 | 第45页 |
| 3.3.7 pGBV-RGPAT9 测序结果分析 | 第45-47页 |
| 3.3.8 pGBV-RGPAT9 转入农杆菌 LBA4404 | 第47页 |
| 3.4 花生 RGPAT9 基因转化花生及再生苗的获得 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 4.1 植物表达载体构建效率的影响因素分析 | 第49页 |
| 4.2 组织培养中抑菌抗生素用量问题 | 第49页 |
| 4.3 组织培养季节性问题 | 第49-50页 |
| 4.4 组织培养中褐变和玻璃化问题 | 第50页 |
| 4.5 再生植株移栽成活率的问题 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 5.1 花生 GPAT9 基因过表达载体的构建 | 第51页 |
| 5.2 花生 GPAT9 基因反义表达载体的构建 | 第51页 |
| 5.3 花生过表达 GPAT9 基因的遗传转化及 PCR 鉴定 | 第51页 |
| 5.4 花生反义 GPAT9 基因的遗传转化 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 附录 | 第59-63页 |
| (一) 主要化学试剂及缓冲液配制 | 第59-60页 |
| (二) 培养基配方 | 第60-62页 |
| (三) 表达载体构建流程图 | 第62-63页 |
| 附件 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
