| 中文摘要 | 第11-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-25页 |
| 1.1 禽呼肠孤病毒的一般生物学研究 | 第16-18页 |
| 1.1.1 分类及形态学 | 第16页 |
| 1.1.2 理化性质 | 第16-17页 |
| 1.1.3 培养特点 | 第17页 |
| 1.1.4 主要临床症状及病理变化 | 第17-18页 |
| 1.2 禽呼肠孤病毒的分子生物学研究 | 第18-21页 |
| 1.2.1 禽呼肠孤病毒的基因组 | 第18页 |
| 1.2.2 禽呼肠孤病毒的主要蛋白 | 第18-21页 |
| 1.2.2.1 λA蛋白 | 第19页 |
| 1.2.2.2 λB蛋白 | 第19页 |
| 1.2.2.3 λC蛋白 | 第19页 |
| 1.2.2.4 μA蛋白 | 第19页 |
| 1.2.2.5 μB蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2.2.6 μNS蛋白 | 第20页 |
| 1.2.2.7 σA蛋白 | 第20页 |
| 1.2.2.8 σB蛋白 | 第20页 |
| 1.2.2.9 σC蛋白,P10蛋白和P17蛋白 | 第20-21页 |
| 1.2.2.10 σNS蛋白 | 第21页 |
| 1.3 诊断方法 | 第21-22页 |
| 1.3.1 病毒分离鉴定 | 第21页 |
| 1.3.2 免疫学检测 | 第21-22页 |
| 1.4 荧光定量RT-PCR技术 | 第22-24页 |
| 1.4.1 实时荧光定量PCR技术原理 | 第22-23页 |
| 1.4.2 实时荧光定量PCR技术分类及特点 | 第23-24页 |
| 1.4.2.1 DNA染料法 | 第23页 |
| 1.4.2.2 探针法 | 第23-24页 |
| 1.4.3 实时荧光定量方法 | 第24页 |
| 1.4.4 荧光定量PCR检测方法的应用 | 第24页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-38页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 病料 | 第25页 |
| 2.1.2 试验动物及SPF鸡胚 | 第25页 |
| 2.1.3 种毒 | 第25页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第26页 |
| 2.1.6 试验相关试剂和溶液的配置 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 鸡呼肠孤病毒的分离与鉴定 | 第27-31页 |
| 2.2.1.1 样品处理 | 第27页 |
| 2.2.1.2 病毒传代 | 第27页 |
| 2.2.1.3 引物 | 第27-28页 |
| 2.2.1.4 病毒RNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.1.5 RT-PCR反应 | 第29页 |
| 2.2.1.6 目的片段的琼脂糖凝胶回收纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.1.7 连接与转化 | 第30-31页 |
| 2.2.1.8 阳性克隆鉴定与测序 | 第31页 |
| 2.2.1.9 病毒纯净度检测 | 第31页 |
| 2.2.1.10 病毒ELD50测定 | 第31页 |
| 2.2.1.11 动物回归试验 | 第31页 |
| 2.2.2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第31-34页 |
| 2.2.2.1 引物及探针的设计 | 第31-32页 |
| 2.2.2.2 383 株病毒液总RNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.2.3 目的基因的扩增及克隆测序 | 第32页 |
| 2.2.2.4 质粒标准品的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.2.5 TaqMan探针荧光定量PCR反应条件的优化 | 第33页 |
| 2.2.2.6 标准曲线的建立 | 第33页 |
| 2.2.2.7 特异性试验 | 第33-34页 |
| 2.2.2.8 敏感性试验 | 第34页 |
| 2.2.2.9 重复性试验 | 第34页 |
| 2.2.2.10 临床样本的检测 | 第34页 |
| 2.2.3 禽呼肠孤病毒对肉鸡的致病性研究 | 第34-38页 |
| 2.2.3.1 病毒增殖 | 第34页 |
| 2.2.3.2 动物分组与人工感染 | 第34页 |
| 2.2.3.3 体重变化的监测 | 第34页 |
| 2.2.3.4 免疫器官指数的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.3.5 病理组织切片的制备及观察 | 第35-36页 |
| 2.2.3.6 禽呼肠孤病毒抗体水平测定 | 第36-37页 |
| 2.2.3.7 血清中生化指标的测定 | 第37页 |
| 2.2.3.8 泄殖腔棉拭子及血液中ARV荧光定量RT-PCR检测 | 第37页 |
| 2.2.3.9 组织器官病毒载量的检测 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-59页 |
| 3.1 呼肠孤病毒分离鉴定结果 | 第38-42页 |
| 3.1.1 呼肠孤病毒分离情况 | 第38页 |
| 3.1.2 呼肠孤病毒σC基因RT-PCR扩增结果 | 第38-39页 |
| 3.1.3 ARVσC基因遗传进化分析 | 第39-41页 |
| 3.1.4 病毒纯净度检测结果 | 第41页 |
| 3.1.5 383 株毒力(ELD50)测定 | 第41-42页 |
| 3.2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立结果 | 第42-46页 |
| 3.2.1 重组质粒的PCR鉴定及其测序分析 | 第42-43页 |
| 3.2.2 荧光定量RT-PCR反应条件的优化 | 第43页 |
| 3.2.3 标准曲线的建立 | 第43-44页 |
| 3.2.4 特异性试验结果 | 第44页 |
| 3.2.5 敏感性试验结果 | 第44-45页 |
| 3.2.6 重复性试验结果 | 第45-46页 |
| 3.2.7 临床样本检测结果 | 第46页 |
| 3.3 呼肠孤病毒对肉鸡的致病性研究 | 第46-59页 |
| 3.3.1 人工感染肉鸡后临床症状 | 第46-48页 |
| 3.3.2 人工感染肉鸡后剖检变化 | 第48-51页 |
| 3.3.3 人工感染肉鸡后病理组织学变化 | 第51-54页 |
| 3.3.4 人工感染肉鸡后体重变化 | 第54页 |
| 3.3.5 人工感染肉鸡后免疫器官指数变化 | 第54-55页 |
| 3.3.6 人工感染肉鸡后血清中ARV抗体水平变化 | 第55页 |
| 3.3.7 人工感染肉鸡后血液生化指标变化情况 | 第55-57页 |
| 3.3.8 人工感染肉鸡后排毒规律及病毒血症情况 | 第57页 |
| 3.3.9 人工感染后肉鸡各组织中ARV载量的测定 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-63页 |
| 4.1 呼肠孤病毒的分离鉴定分析 | 第59-60页 |
| 4.2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立分析 | 第60页 |
| 4.3 呼肠孤病毒对肉鸡的致病性研究分析 | 第60-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
