| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第14-30页 |
| 第一章 新城疫病毒 | 第14-30页 |
| 1.1 新城疫病毒概述 | 第14-17页 |
| 1.1.1 新城疫病毒 | 第14页 |
| 1.1.2 NDV的病原学特性 | 第14-17页 |
| 1.2 新城疫病毒的分子流行病学 | 第17-21页 |
| 1.3 NDV的分子致病机理 | 第21-23页 |
| 1.4 新城疫病毒F蛋白 | 第23-28页 |
| 1.4.1 F蛋白 | 第23-25页 |
| 1.4.2 F蛋白裂解位点氨基酸序列及膜融合机制 | 第25-28页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第28-30页 |
| 试验研究 | 第30-93页 |
| 第二章 NDV天然分离株F蛋白裂解位点氨基酸序列的多样性 | 第30-39页 |
| 2.1 材料与方法 | 第30-31页 |
| 2.1.1 数据材料 | 第30-31页 |
| 2.1.2 统计分析 | 第31页 |
| 2.2 结果 | 第31-37页 |
| 2.2.1 F蛋白裂解位点氨基酸序列的多样性及其分类 | 第31-33页 |
| 2.2.2 F蛋白裂解位点氨基酸多样性的时空分布特点 | 第33-34页 |
| 2.2.3 F蛋白裂解位点氨基酸多样性与主要宿主之间的关系 | 第34-35页 |
| 2.2.4 F蛋白裂解位点各氨基酸种类的保守性分析 | 第35-37页 |
| 2.3 讨论 | 第37-38页 |
| 2.4 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 F蛋白裂解位点氨基酸序列多样性对细胞膜融合能力的影响 | 第39-61页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 质粒 | 第39页 |
| 3.1.2 细胞和病毒 | 第39页 |
| 3.1.3 试剂和仪器 | 第39-40页 |
| 3.2 方法 | 第40-47页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第40-42页 |
| 3.2.2 野生型毒株F48E9和LaSotaF与HN蛋白表达载体构建 | 第42-44页 |
| 3.2.3 F蛋白裂解位点氨基酸序列突变的F蛋白表达载体构建 | 第44-45页 |
| 3.2.4 Westernblotting检测目的蛋白的表达 | 第45-47页 |
| 3.2.5 细胞融合活性的定性和定量分析 | 第47页 |
| 3.3 结果 | 第47-59页 |
| 3.3.1 重组质粒pCAG-F48-F-Flag、pCAG-F48-HN和pCAG-La-F-Flag、pCAG-F48-HN的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.2 F和HN蛋白促细胞融合活性呈现剂量依赖性 | 第48-49页 |
| 3.3.3 含VFcs的F突变体对促细胞膜融合活性的影响 | 第49-53页 |
| 3.3.4 人工突变的VFcsF突变体对促细胞膜融合活性的影响 | 第53-55页 |
| 3.3.5 含AFcs的F突变体对促细胞膜融合活性的影响 | 第55-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-60页 |
| 3.5 小结 | 第60-61页 |
| 第四章 裂解位点氨基酸基序为“RRQRR↓L”的NDVF蛋白HR2区氨基酸突变对细胞膜融合活性的影响 | 第61-85页 |
| 4.1 材料 | 第61页 |
| 4.1.2 细胞、质粒和毒株 | 第61页 |
| 4.2 方法 | 第61-65页 |
| 4.2.1 NDVF蛋白的主要功能域划分 | 第61页 |
| 4.2.2 区段替换及点突变引物设计 | 第61-63页 |
| 4.2.3 各种F蛋白突变体重组载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.2.4 细胞融合活性的定性和定量分析 | 第64页 |
| 4.2.5 流式细胞术(FCM)定量检测F突变体的细胞膜表面表达效率 | 第64-65页 |
| 4.2.6 免疫荧光试验(IFA)定性分析F蛋白突变体的表达 | 第65页 |
| 4.2.7 实验数据的统计学分析 | 第65页 |
| 4.3 结果 | 第65-82页 |
| 4.3.1 在Fcs相同情况下,强弱毒F蛋白对细胞膜融合活性的影响 | 第65-67页 |
| 4.3.2 以F48-F*质粒为骨架的F突变体载体构建及其对细胞融合活性的影响 | 第67-71页 |
| 4.3.3 以F48/La118-499质粒为骨架的F突变体载体构建及其对细胞融合活性的影响 | 第71-74页 |
| 4.3.4 F48/La118-499质粒上点突变的F突变体载体构建及其对细胞融合活性的影响 | 第74-77页 |
| 4.3.5 以La-F*质粒为骨架的F突变体载体构建及其对细胞融合的影响 | 第77-82页 |
| 4.4 讨论 | 第82-84页 |
| 4.5 小结 | 第84-85页 |
| 第五章 NDV致细胞膜融合作用检测方法的初步建立 | 第85-93页 |
| 5.1 材料与方法 | 第85-86页 |
| 5.1.1 细胞、病毒与质粒 | 第85页 |
| 5.1.2 试剂和仪器 | 第85-86页 |
| 5.2 方法 | 第86-87页 |
| 5.2.1 慢病毒空载体包装 | 第86页 |
| 5.2.2 稳定表达GFP和tRFPBHK-21细胞系的建立 | 第86-87页 |
| 5.2.3 细胞融合检测及融合效率分析 | 第87页 |
| 5.3 结果 | 第87-90页 |
| 5.3.1 GFP或tRFP蛋白标记的慢病毒载体的包装 | 第87-88页 |
| 5.3.2 BHK-21-GFP/tRFP稳转细胞系的建立 | 第88页 |
| 5.3.3 不同感染时间及不同剂量条件下NDV对细胞融合活性的影响 | 第88-89页 |
| 5.3.4 流式细胞术对细胞融合活性的定量分析 | 第89-90页 |
| 5.4 讨论 | 第90-92页 |
| 5.5 小结 | 第92-93页 |
| 全文结论 | 第93-94页 |
| 本论文的创新点 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-108页 |
| 缩略词表 | 第108-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 作者简介 | 第111页 |
