| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10页 |
| 1.前言 | 第11-21页 |
| 1.1 奶牛N利用率低 | 第11页 |
| 1.2 乳腺上皮细胞 | 第11-12页 |
| 1.3 乳蛋白 | 第12-13页 |
| 1.3.1 乳蛋白概述 | 第12页 |
| 1.3.2 乳蛋白合成过程 | 第12-13页 |
| 1.4 蛋白翻译的调控机制 | 第13-14页 |
| 1.4.1 蛋白翻译起始关键控制点 | 第13页 |
| 1.4.2 翻译起始的调控机制 | 第13-14页 |
| 1.4.3 翻译延伸的调控 | 第14页 |
| 1.5 影响蛋白合成的营养因素 | 第14-16页 |
| 1.5.1 氨基酸及氨基酸利用 | 第14-15页 |
| 1.5.2 胰岛素 | 第15-16页 |
| 1.5.3 葡萄糖 | 第16页 |
| 1.6 乳蛋白合成的信号调控机制 | 第16-20页 |
| 1.6.1 mTOR信号通路 | 第16-18页 |
| 1.6.1.1 mTOR上游信号通路 | 第17-18页 |
| 1.6.1.2 mTOR下游信号通路 | 第18页 |
| 1.6.2 氨基酸影响乳蛋白合成的作用机理 | 第18-19页 |
| 1.6.3 胰岛素影响乳蛋白合成的作用机理 | 第19页 |
| 1.6.4 葡萄糖调控乳蛋白合成的机理 | 第19-20页 |
| 1.7 养分互作 | 第20-21页 |
| 1.8 研究目的与意义 | 第21页 |
| 2.材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.2 试验仪器与试剂 | 第21-25页 |
| 2.2.1 试验仪器 | 第21-23页 |
| 2.2.2 试验试剂 | 第23-25页 |
| 2.3 试剂配制 | 第25页 |
| 2.4 试验设计 | 第25-28页 |
| 2.4.1 氨基酸、葡萄糖和胰岛素对MAC-T细胞增殖活性的影响 | 第25-26页 |
| 2.4.2 不同浓度胰岛素对乳腺上皮细胞周期影响 | 第26-27页 |
| 2.4.3 氨基酸、葡萄糖和胰岛素对MAC-T细胞乳蛋白合成相关基因表达的影响 | 第27-28页 |
| 2.5 试验方法 | 第28-30页 |
| 2.5.1 奶牛乳腺上皮细胞系MAC-T细胞的培养与鉴定 | 第28-30页 |
| 2.5.1.1 MAC-T的复苏 | 第28页 |
| 2.5.1.2 MAC-T的换液与传代 | 第28-29页 |
| 2.5.1.3 MAC-T细胞的冻存 | 第29-30页 |
| 2.5.2 观察MAC-T细胞的形态学 | 第30页 |
| 2.5.3 MAC-T细胞生长曲线的绘制 | 第30页 |
| 2.6 CCK-8法测定细胞增殖率 | 第30页 |
| 2.7 MAC-T细胞周期 | 第30-31页 |
| 2.8 RNA提取与纯度鉴定 | 第31-32页 |
| 2.8.1 cDNA的合成 | 第31-32页 |
| 2.9 实时荧光定量PCR | 第32-34页 |
| 2.10 细胞蛋白的提取 | 第34页 |
| 2.11 总蛋白浓度的测定 | 第34-35页 |
| 2.12 Western Blotting | 第35-37页 |
| 2.12.1 制备分离胶和浓缩胶 | 第35-36页 |
| 2.12.2 SDS-PAGE电泳 | 第36页 |
| 2.12.3 转膜 | 第36-37页 |
| 2.12.4 剪膜和免疫反应 | 第37页 |
| 2.12.5 化学发光与显影 | 第37页 |
| 2.13 数据处理 | 第37-38页 |
| 3.结果 | 第38-50页 |
| 3.1 奶牛MAC-T细胞的生物学性状检测 | 第38-39页 |
| 3.1.1 MAC-T细胞的形态观察 | 第38-39页 |
| 3.1.2 MAC-T细胞生长曲线 | 第39页 |
| 3.2 不同浓度氨基酸、胰岛素和葡萄糖对MAC-T增殖的影响 | 第39-43页 |
| 3.2.1 不同浓度葡萄糖对MAC-T增殖活性的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.2 不同浓度氨基酸对奶牛MAC-T增殖活性的影响 | 第40页 |
| 3.2.3 不同浓度胰岛素对奶牛MAC-T增殖活性的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.4 氨基酸、葡萄糖对奶牛MAC-T增殖活性的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.5 氨基酸、胰岛素对奶牛MAC-T增殖活性的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 不同浓度胰岛素对MAC-T细胞周期的影响 | 第43-44页 |
| 3.4 氨基酸、葡萄糖、胰岛素对MAC-T乳蛋白合成相关基因的影响 | 第44-47页 |
| 3.4.1 不同浓度胰岛素对MAC-T乳蛋白合成相关基因的影响 | 第44-46页 |
| 3.4.1.1 不同浓度胰岛素对CSN3基因mRNA表达的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.1.2 不同浓度胰岛素对MAC-T中相关基因mRNA表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.2 氨基酸、葡萄糖对MAC-T中CSN3基因mRNA表达的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.3 氨基酸、胰岛素对MAC-T中CSN3基因mRNA表达的影响 | 第47页 |
| 3.5 氨基酸、葡萄糖、胰岛素对MAC-T乳蛋白合成相关信号蛋白磷酸化的影响 | 第47-50页 |
| 3.5.1 氨基酸和胰岛素对乳腺上皮细胞相关信号蛋白磷酸化 | 第47-49页 |
| 3.5.2 氨基酸和葡萄糖对奶牛乳腺上皮细胞相关信号蛋白磷酸化 | 第49-50页 |
| 4.讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 氨基酸、葡萄糖和胰岛素对细胞增殖活性的影响 | 第50页 |
| 4.2 不同浓度胰岛素对MAC-T细胞周期的影响 | 第50-51页 |
| 4.3 氨基酸、葡萄糖和胰岛素对MAC-T乳蛋白合成相关基因表达的影响 | 第51-52页 |
| 4.4 氨基酸、葡萄糖和胰岛素对MAC-T乳蛋白合成相关信号蛋白磷酸化的影响 | 第52-54页 |
| 5.总体结论和创新点 | 第54页 |
| 5.1 总体结论 | 第54页 |
| 5.2 创新点 | 第54页 |
| 6.研究展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
