| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 英文缩略词及中文对照 | 第6-12页 |
| 一、引言 | 第12-31页 |
| (一)肿瘤细胞代谢重编程 | 第12-18页 |
| 1.Warburg效应 | 第13-15页 |
| 2.Warburg效应受代谢酶调节 | 第15-17页 |
| 3.Warburg效应受致癌基因调节 | 第17-18页 |
| (二)PKM2的研究进展 | 第18-25页 |
| 1.PKM2的表达及调控 | 第18-20页 |
| 2.PKM2的活性及调控 | 第20-22页 |
| 3.PKM2的非代谢酶功能及调控 | 第22-25页 |
| (三)O-GlcNAc修饰 | 第25-29页 |
| 1.HBP途径和UDP-GlcNAc | 第25-26页 |
| 2.OGT和OGA | 第26-27页 |
| 3.O-GlcNAc修饰的功能 | 第27-29页 |
| (四)本研究的立题依据、主要研究内容和意义 | 第29-31页 |
| 二、实验材料与方法 | 第31-61页 |
| (一)实验材料 | 第31-37页 |
| 1.人源细胞 | 第31页 |
| 2.乳腺癌组织 | 第31页 |
| 3.实验动物 | 第31-34页 |
| 4.抗体 | 第34页 |
| 5.试剂 | 第34-36页 |
| 6.仪器及设备 | 第36-37页 |
| (二)实验方法 | 第37-61页 |
| 1.人T淋巴细胞分选 | 第37页 |
| 2.T淋巴细胞激活和扩增 | 第37-38页 |
| 3.细胞培养 | 第38页 |
| 4.检测PKM2O-GlcNAc修饰位点 | 第38-39页 |
| 5.PKM2O-GlcNAc修饰结构建模 | 第39页 |
| 6.质粒构建 | 第39-44页 |
| 7.实时荧光定量PCR(qPCR) | 第44-45页 |
| 8.总蛋白提取 | 第45页 |
| 9.细胞浆蛋白和核蛋白提取 | 第45-46页 |
| 10.免疫共沉淀(IP) | 第46页 |
| 11.免疫印迹(WB) | 第46-48页 |
| 12.戊二醛交联法检测蛋白寡聚状态 | 第48页 |
| 13.稳转细胞系构建 | 第48-49页 |
| 14.免疫荧光(IF) | 第49-50页 |
| 15.化学点击法检测蛋白O-GlcNAc修饰 | 第50-52页 |
| 16.PKM2活性检测 | 第52-53页 |
| 17.葡萄糖含量检测 | 第53页 |
| 18.乳酸含量检测 | 第53-54页 |
| 19.细胞外酸化率(ECAR)和氧消耗速率(OCR)检测 | 第54-56页 |
| 20.脂类合成检测 | 第56页 |
| 21.DNA合成检测 | 第56页 |
| 22.染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第56-59页 |
| 23.裸鼠肿瘤移植与肿瘤生长检测 | 第59页 |
| 24.免疫组化(IHC) | 第59-60页 |
| 25.数据统计分析 | 第60-61页 |
| 三、实验结果 | 第61-84页 |
| (一)PKM2的表达在肿瘤细胞和组织中显著上调 | 第61页 |
| (二)PKM2的O-GlcNAc修饰水平在肿瘤细胞和组织中显著上调 | 第61-67页 |
| (三)Thr405和Ser406是PKM2的主要O-GlcNAc修饰位点 | 第67-70页 |
| (四)PKM2的O-GlcNAc修饰受葡萄糖和谷氨酰胺浓度调节 | 第70-71页 |
| (五)O-GlcNAc修饰促进PKM2四聚体解聚 | 第71-73页 |
| (六)PKM2四聚体解聚提高脂类和DNA合成 | 第73-74页 |
| (七)PKM2四聚体解聚促进其核易位 | 第74-75页 |
| (八)PKM2的O-GlcNAc修饰通过上调Ser37磷酸化促进其核易位 | 第75-77页 |
| (九)核内的PKM2促进肿瘤细胞Warburg效应的发生 | 第77-80页 |
| (十)PKM2的O-GlcNAc修饰促进肿瘤生长 | 第80-84页 |
| 四、讨论 | 第84-91页 |
| (一)O-GlcNAc修饰同时改变PKM2代谢酶和非代谢酶功能 | 第84页 |
| (二)O-GlcNAc修饰直接改变PKM2的寡聚状态 | 第84-85页 |
| (三)O-GlcNAc修饰与磷酸化的Crosstalk导致PKM2核易位 | 第85-86页 |
| (四)PKM2O-GlcNAc修饰受肿瘤微环境中营养波动调节 | 第86-87页 |
| (五)基因可变剪切为PKM2的O-GlcNAc修饰提供调控靶点 | 第87-88页 |
| (六)O-GlcNAc修饰导致乳酸积累及可能机制 | 第88-89页 |
| (七)应用与展望 | 第89-91页 |
| 结论 | 第91-92页 |
| 创新点 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 在学期间公开发表论文情况 | 第107页 |
