| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 中英文对照及英文缩写词表 | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 半乳凝集素 | 第13-14页 |
| 1.2 半乳凝集素-3概述 | 第14页 |
| 1.3 Gal-3的结构 | 第14-15页 |
| 1.4 Gal-3的修饰、分布及存在形式 | 第15-16页 |
| 1.5 Gal-3的功能 | 第16-23页 |
| 1.5.1 Gal-3在肿瘤发生、发展及转移中的作用 | 第16-17页 |
| 1.5.2 Gal-3在细胞凋亡中的作用 | 第17-19页 |
| 1.5.3 Gal-3在细胞增殖和分化中的作用 | 第19页 |
| 1.5.4 Gal-3在细胞黏附中的作用 | 第19页 |
| 1.5.5 Gal-3在血管形成及血管内皮细胞迁移中的作用 | 第19-22页 |
| 1.5.6 CRD功能概述 | 第22-23页 |
| 1.6 Gal-3受体 | 第23-27页 |
| 1.6.1 Integrin简介 | 第23-25页 |
| 1.6.2 免疫球蛋白超家族及CD146简介 | 第25-27页 |
| 1.7 论文立题依据、研究内容、目的及意义 | 第27-29页 |
| 第二章 Gal-3对HMEC-1细胞迁移的影响及相关受体筛选 | 第29-56页 |
| 2.1 材料、试剂和设备 | 第29-35页 |
| 2.1.1 材料 | 第29-30页 |
| 2.1.2 主要试剂和配制 | 第30-34页 |
| 2.1.3 主要仪器和耗材 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-43页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.2.2 pET-28a(+)-Gal-3,pET-28a(+)-CRD和pET-28a(+)-NT质粒的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.3 蛋白质的大量制备 | 第36-37页 |
| 2.2.4 细胞的复苏 | 第37页 |
| 2.2.5 细胞培养及传代 | 第37页 |
| 2.2.6 细胞冻存 | 第37页 |
| 2.2.7 蛋白定量及SDS-PAGE和WesternBlot实验 | 第37-38页 |
| 2.2.8 细胞迁移 | 第38-39页 |
| 2.2.9 慢病毒载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2.10 慢病毒的包装 | 第40-41页 |
| 2.2.11 目的细胞的感染 | 第41页 |
| 2.2.12 细胞膜分离 | 第41页 |
| 2.2.13 免疫共沉淀法 | 第41-42页 |
| 2.2.14 硝酸银染色法及质谱检测 | 第42页 |
| 2.2.15 数据统计及分析 | 第42-43页 |
| 2.3 结果 | 第43-53页 |
| 2.3.1 His-Gal-3、His-CRD和His-NT蛋白的纯化结果 | 第43页 |
| 2.3.2 Gal-3对HMEC-1细胞迁移的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.3 Gal-3不同截短蛋白对HMEC-1细胞迁移的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.4 CRD对HMEC-1细胞迁移的影响 | 第45页 |
| 2.3.5 Gal-3和CRD促进HMEC-1细胞迁移具有细胞密度依赖性 | 第45-46页 |
| 2.3.6 游离态和固定态的Gal-3和CRD对HMEC-1细胞迁移的影响 | 第46-47页 |
| 2.3.7 LPS对Gal-3和CRD诱导HMEC-1细胞迁移的影响 | 第47-48页 |
| 2.3.8 .αvintegrin在Gal-3诱导细胞迁移中的作用 | 第48-49页 |
| 2.3.9 EGFR和VEGFR2在Gal-3诱导HMEC-1细胞迁移中的作用 | 第49-52页 |
| 2.3.10 筛选HMEC-1细胞膜上未知的Gal-3受体 | 第52页 |
| 2.3.11 质谱分析结果 | 第52-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-54页 |
| 2.5 小结 | 第54-56页 |
| 第三章 β1integrin在Gal-3和CRD诱导HMEC-1迁移中的作用及机制 | 第56-71页 |
| 3.1 材料、试剂及仪器 | 第56-57页 |
| 3.1.1 材料 | 第56页 |
| 3.1.2 主要试剂及配制 | 第56-57页 |
| 3.1.3 主要仪器和耗材 | 第57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-60页 |
| 3.2.1 感受态细胞的制备 | 第57页 |
| 3.2.2 GST、GST-Gal-3及GST-CRD蛋白的制备 | 第57-58页 |
| 3.2.3 慢病毒质粒的构建 | 第58-59页 |
| 3.2.4 慢病毒的包装 | 第59页 |
| 3.2.5 目的细胞的感染 | 第59页 |
| 3.2.6 免疫印迹实验 | 第59页 |
| 3.2.7 细胞迁移及数据统计 | 第59-60页 |
| 3.2.8 Pulldown方法 | 第60页 |
| 3.2.9 数据统计及分析 | 第60页 |
| 3.3 结果 | 第60-69页 |
| 3.3.1 Gal-3和CRD与β1integrin作用 | 第60-61页 |
| 3.3.2 β1integrin在Gal-3和CRD诱导HMEC-1细胞迁移中的作用 | 第61-63页 |
| 3.3.3 敲低β1integrin对αintegrin亚基表达的影响 | 第63-64页 |
| 3.3.4 αintegrin亚基与Gal-3的相互作用 | 第64-65页 |
| 3.3.5 αintegrin亚基在Gal-3及CRD诱导HMEC-1细胞迁移中的作用 | 第65-67页 |
| 3.3.6 β1integrin在Gal-3和CRD诱导HMEC-1迁移的作用机制研究 | 第67-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-70页 |
| 3.5 小结 | 第70-71页 |
| 第四章 CD146在Gal-3诱导HMEC-1细胞迁移中的作用及与Gal-3作用的分子机制 | 第71-95页 |
| 4.1 材料、试剂及仪器 | 第71-72页 |
| 4.1.1 材料 | 第71页 |
| 4.1.2 主要试剂及配制 | 第71-72页 |
| 4.1.3 主要仪器及耗材 | 第72页 |
| 4.2 实验方法 | 第72-77页 |
| 4.2.1 细胞复苏 | 第72-73页 |
| 4.2.2 细胞培养及传代 | 第73页 |
| 4.2.3 细胞冻存 | 第73页 |
| 4.2.4 CD146胞外段及其胞外段截短蛋白的大量制备 | 第73-74页 |
| 4.2.5 质谱分析CD146的糖基化位点及糖型 | 第74-75页 |
| 4.2.6 Pulldown方法检测CD146与Gal-3及CRD的直接作用 | 第75页 |
| 4.2.7 生物膜干涉法检测CD146与Gal-3的亲和力大小 | 第75页 |
| 4.2.8 免疫共沉淀法检测CD146及D1-D4蛋白与Gal-3的作用 | 第75页 |
| 4.2.9 慢病毒包装 | 第75-76页 |
| 4.2.10 RT-PCR | 第76-77页 |
| 4.2.11 细胞迁移及数据统计分析 | 第77页 |
| 4.3 结果 | 第77-93页 |
| 4.3.1 CD146在Gal-3诱导HMEC-1细胞迁移中的作用 | 第77-78页 |
| 4.3.2 Gal-3对CD146mRNA表达的影响 | 第78-79页 |
| 4.3.3 Gal-3对CD146蛋白表达的影响 | 第79页 |
| 4.3.4 Gal-3对CD146蛋白二聚化的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.5 CD146与Gal-3的相互作用 | 第80-81页 |
| 4.3.6 CD146蛋白的表达及纯化 | 第81-82页 |
| 4.3.7 CD146蛋白在溶液中的存在形态 | 第82-84页 |
| 4.3.8 CD146与Gal-3在分子水平的作用 | 第84-86页 |
| 4.3.9 CD146胞外段截短蛋白的表达及纯化 | 第86页 |
| 4.3.10 D1-D4蛋白在溶液中的存在形态 | 第86-88页 |
| 4.3.11 Domain5是CD146与Gal-3作用的关键结构域 | 第88-90页 |
| 4.3.12 CD146胞外段蛋白的糖基化位点 | 第90-91页 |
| 4.3.13 CD146胞外段蛋白的糖链分析 | 第91-93页 |
| 4.4 讨论 | 第93-94页 |
| 4.5 小结 | 第94-95页 |
| 全文总结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 博士期间发表论文情况 | 第110页 |
