| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 哈维氏弧菌 | 第10页 |
| 1.2 哈维氏弧菌的检测方法 | 第10-12页 |
| 1.2.1 基于细菌生理生化特性的检测法 | 第10-11页 |
| 1.2.2 基于免疫学技术的检测方法 | 第11页 |
| 1.2.3 基于分子生物学技术的检测法 | 第11-12页 |
| 1.3 免疫层析技术 | 第12-15页 |
| 1.3.1 快速检测试纸条 | 第12-13页 |
| 1.3.2 试纸条的基本结构 | 第13-14页 |
| 1.3.3 试纸条的基本检测原理 | 第14-15页 |
| 1.3.4 免疫层析试纸条在病害检测中的应用 | 第15页 |
| 1.4 斑点杂交技术 | 第15-17页 |
| 1.4.1 斑点杂交法检测原理 | 第15-16页 |
| 1.4.2 斑点杂交法基本结构 | 第16-17页 |
| 1.4.3 斑点杂交法的应用 | 第17页 |
| 1.5 本课题研究内容及意义 | 第17-18页 |
| 第2章 哈维氏弧菌单克隆抗体的制备 | 第18-35页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 材料 | 第18-20页 |
| 2.2.1 菌株、细胞及实验动物 | 第18-19页 |
| 2.2.2 试剂、培养基及缓冲溶液 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-28页 |
| 2.3.1 抗原的制备 | 第20页 |
| 2.3.2 小鼠血清的采集 | 第20-21页 |
| 2.3.3 小鼠免疫 | 第21页 |
| 2.3.4 小鼠阳性血清效价测定 | 第21-22页 |
| 2.3.5 小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0的准备 | 第22-23页 |
| 2.3.6 饲养细胞的制备 | 第23页 |
| 2.3.7 细胞融合 | 第23-24页 |
| 2.3.8 融合细胞的培养及扩大 | 第24-25页 |
| 2.3.9 阳性杂交瘤细胞株的筛选 | 第25页 |
| 2.3.10 杂交瘤细胞株的去交叉反应 | 第25页 |
| 2.3.11 杂交瘤细胞株的亚克隆 | 第25-26页 |
| 2.3.12 杂交瘤细胞株支原体检测 | 第26页 |
| 2.3.13 杂交瘤细胞株的冻存及复苏 | 第26页 |
| 2.3.14 小鼠腹水制备 | 第26-27页 |
| 2.3.15 单克隆抗体的制备与纯化 | 第27页 |
| 2.3.16 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.17 单克隆抗体的效价测定 | 第28页 |
| 2.3.18 单克隆抗体的浓度测定 | 第28页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.4.1 小鼠免疫 | 第28-29页 |
| 2.4.2 细胞融合与筛选 | 第29-30页 |
| 2.4.3 单克隆抗体细胞株的鉴定 | 第30-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-34页 |
| 2.6 结论 | 第34-35页 |
| 第3章 哈维氏弧菌胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第35-47页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 材料 | 第35页 |
| 3.2.1 菌株及实验动物 | 第35页 |
| 3.2.2 试剂和溶液 | 第35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-39页 |
| 3.3.1 抗哈维氏弧菌多克隆抗体的制备 | 第35-36页 |
| 3.3.2 柠檬酸三钠还原法制备胶体金 | 第36-37页 |
| 3.3.3 胶体金与抗体结合条件优化 | 第37-38页 |
| 3.3.4 胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第38-39页 |
| 3.3.5 胶体金试纸条性能检测 | 第39页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第39-43页 |
| 3.4.1 多克隆抗体制备 | 第39-40页 |
| 3.4.2 胶体金溶液制备 | 第40页 |
| 3.4.3 胶体金与抗体结合条件优化 | 第40-43页 |
| 3.4.4 试纸条性能检测 | 第43页 |
| 3.5 讨论 | 第43-45页 |
| 3.6 结论 | 第45-47页 |
| 第4章 ECL介导的哈维氏弧菌斑点杂交快速检测方法的建立 | 第47-56页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 材料 | 第47页 |
| 4.2.1 菌株 | 第47页 |
| 4.2.2 试剂及仪器 | 第47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.3.1 间接ELISA条件优化 | 第47-48页 |
| 4.3.2 斑点杂交 | 第48-49页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第49-53页 |
| 4.4.1 间接ELISA | 第49页 |
| 4.4.2 斑点杂交实验条件优化 | 第49-50页 |
| 4.4.3 化学发光介导的斑点杂交条件优化 | 第50页 |
| 4.4.4 不同检测方法灵敏度比较 | 第50-51页 |
| 4.4.5 改良型斑点杂交法特异性检测 | 第51-53页 |
| 4.4.6 改良型斑点杂交法对人工接菌孵育样品的检测 | 第53页 |
| 4.5 讨论 | 第53-55页 |
| 4.6 结论 | 第55-56页 |
| 第5章 结论、创新点及展望 | 第56-58页 |
| 5.1 结论 | 第56页 |
| 5.2 创新点 | 第56页 |
| 5.3 展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |