| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第一章 前言 | 第15-47页 |
| 1.1 斑马鱼心脏发育概述 | 第16-36页 |
| 1.1.1 前心中胚层的诱导 | 第17-20页 |
| 1.1.2 心管的形成 | 第20-24页 |
| 1.1.3 心内膜细胞的分化 | 第24-26页 |
| 1.1.4 心脏功能的开始 | 第26-28页 |
| 1.1.5 腔室的形成 | 第28-31页 |
| 1.1.6 环化 | 第31-34页 |
| 1.1.7 心脏瓣膜的建成 | 第34-36页 |
| 1.2 研究基因的背景概述 | 第36-44页 |
| 1.2.1 Fox家族的研究背景 | 第36-39页 |
| 1.2.2 组织蛋白酶(Cathepsins)的功能简介 | 第39-40页 |
| 1.2.3 肌动蛋白Titin-Cap(TCap)作用的分子机制 | 第40-42页 |
| 1.2.4 FBXL5的研究背景 | 第42-44页 |
| 1.3 本文研究的意义 | 第44-47页 |
| 第二章 材料与方法 | 第47-70页 |
| 2.1 材料 | 第47-52页 |
| 2.1.1 酶类和试剂盒 | 第47-48页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第48-49页 |
| 2.1.3 人类多组织膜Multiple Tissue Northern Blot | 第49页 |
| 2.1.4 其他试剂 | 第49-50页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第50-51页 |
| 2.1.6 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第51-52页 |
| 2.2 方法 | 第52-70页 |
| 2.2.1 总RNA的抽提 | 第52页 |
| 2.2.2 反应混合液配制 | 第52-53页 |
| 2.2.3 PCR反应 | 第53-54页 |
| 2.2.4 PCR产物的纯化回收 | 第54-55页 |
| 2.2.5 PCR产物(酶切产物)与T-载体(其他目标载体)的连接 | 第55-56页 |
| 2.2.6 转化(热休克法) | 第56页 |
| 2.2.7 质粒的小量制备 | 第56-57页 |
| 2.2.8 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第57页 |
| 2.2.9 测序 | 第57-58页 |
| 2.2.10 RT-PCR | 第58-59页 |
| 2.2.11 Northern Blot | 第59-60页 |
| 2.2.12 细胞培养 | 第60-61页 |
| 2.2.13 细胞瞬时转染和稳定转染的筛选 | 第61页 |
| 2.2.14 荧光素酶活性分析 | 第61-62页 |
| 2.2.15 Western Blot | 第62-63页 |
| 2.2.16 酵母双杂交分析 | 第63页 |
| 2.2.17 免疫共沉淀 | 第63-64页 |
| 2.2.18 FoxP4蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第64页 |
| 2.2.19 FoxP4蛋白多克隆抗体的产生及纯化 | 第64-65页 |
| 2.2.20 细胞生长计数与流式细胞仪分析 | 第65-66页 |
| 2.2.21 斑马鱼RNA干扰 | 第66页 |
| 2.2.22 斑马鱼morpholino技术 | 第66-67页 |
| 2.2.23 斑马鱼整体胚胎原位杂交 | 第67-70页 |
| 第三章 结果分析 | 第70-107页 |
| 3.1 本文构建的质粒 | 第70-72页 |
| 3.2 FoxP4的基因、蛋白质结构及其在模式动物中保守度分析 | 第72-78页 |
| 3.2.1 FoxP4的基因和cDNA结构分析 | 第72-75页 |
| 3.2.2 FoxP4蛋白在模式动物中保守度分析 | 第75-78页 |
| 3.3 FoxP4的表达研究 | 第78-80页 |
| 3.3.1 FoxP4在细胞中的表达和定位 | 第78-79页 |
| 3.3.2 FoxP4在人体组织的表达 | 第79-80页 |
| 3.4 FoxP4功能的初步研究 | 第80-86页 |
| 3.4.1 FoxP4对细胞周期的调控 | 第80-82页 |
| 3.4.2 FoxP4多克隆抗体的制备及检测 | 第82-83页 |
| 3.4.3 用酵母双杂交技术筛选与FoxP4相互作用的基因 | 第83-84页 |
| 3.4.4 FoxP4与Cat D、TCap和FBXL5相互作用的验证 | 第84-86页 |
| 3.5 FoxP4和FBXL5斑马鱼同源基因在斑马鱼胚胎中的表达分析 | 第86-88页 |
| 3.5.1 FoxP4在斑马鱼胚胎中的表达 | 第86-87页 |
| 3.5.2 FBXL5在斑马鱼胚胎中的表达 | 第87-88页 |
| 3.6 利用斑马鱼RNA干扰研究FoxP4及其相互作用基因的功能 | 第88-92页 |
| 3.6.1 用斑马鱼RNA干扰研究FoxP4与CatD的功能 | 第89-90页 |
| 3.6.2 用斑马鱼RNA干扰研究FoxP4与Tcap的功能 | 第90-91页 |
| 3.6.3 用斑马鱼RNA干扰研究FBXL5的功能 | 第91-92页 |
| 3.7 利用morpholino oligos敲减技术研究FoxP4及其相互基因的功能 | 第92-98页 |
| 3.7.1 用morpholino oligos敲减技术研究FoxP4与CatD的功能 | 第93-95页 |
| 3.7.2 用morpholino oligos敲减技术研究FoxP4与Tcap的功能 | 第95-96页 |
| 3.7.3 用morpholino oligos敲减技术研究FoxP4与FBXL5的功能 | 第96-98页 |
| 3.8 mRNA拯救技术研究FBXL5的功能 | 第98-99页 |
| 3.9 FoxP4与其相互作用基因的信号途径分析 | 第99-105页 |
| 3.9.1 RT-PCR分析FoxP4与其相互作用基因在心脏发育信号通路中的作用 | 第100-103页 |
| 3.9.2 荧光素酶检测系统分析FBXL5在心脏发育信号通路中的作用 | 第103-104页 |
| 3.9.3 Western Blot分析FBXL5在心脏发育信号通路中的作用 | 第104-105页 |
| 3.10 FoxP4与其相互作用基因研究小结 | 第105-107页 |
| 第四章 讨论 | 第107-112页 |
| 第五章 其他工作:nppa:GFP转基因斑马鱼的构建 | 第112-121页 |
| 5.1 材料与方法 | 第112-115页 |
| 5.1.1 斑马鱼的饲养 | 第112-113页 |
| 5.1.2 nppa:GFP转基因斑马鱼的构建和筛选 | 第113页 |
| 5.1.3 nppa:GFP转基因斑马鱼插入位点分析 | 第113页 |
| 5.1.4 原位杂交 | 第113-114页 |
| 5.1.5 心脏形态和生理测量 | 第114-115页 |
| 5.1.6 统计学分析 | 第115页 |
| 5.2 结果 | 第115-119页 |
| 5.2.1 转基因斑马鱼构建和筛选成功 | 第115-116页 |
| 5.2.2 转基因斑马鱼插入位点分析结果 | 第116页 |
| 5.2.3 转基因斑马鱼GFP的表达与野生型内源性nppa表达的比较 | 第116-117页 |
| 5.2.4 nppa:GFP转基因斑马鱼心脏形态学分析 | 第117-118页 |
| 5.2.5 nppa:GFP转基因斑马鱼心脏生理学分析 | 第118-119页 |
| 5.3 讨论 | 第119-121页 |
| 结语 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-148页 |
| 附录一 | 第148-150页 |
| 附录二 | 第150-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
