ACKNOWLEDGEMENTS | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7页 |
I INTRODUCTION | 第8-11页 |
II LITERATURE | 第11-20页 |
II 1.ANIMAL LECTINS | 第12-20页 |
II 1. 1. DETECTION | 第12-13页 |
II.1.2 ISOLATION AND PURIFICATION | 第13页 |
II.1.3. CLASSIFICATION | 第13-16页 |
II.1.3.1. Galectins | 第13-14页 |
II.1.3.2. C-type lectins | 第14页 |
II.1.3.3. P-type lectins | 第14页 |
II.1.3.4. Pentraxins | 第14-15页 |
II.1.3.5. Siglecs | 第15页 |
II.1.3.6. Calnexin,calreticulin and calmegin | 第15页 |
II.1.3.7. Ficolins and intelectins | 第15-16页 |
II.1.3.8. Other animal lectins | 第16页 |
II.1.4. FUNCTIONS | 第16-18页 |
II.1.5. APPLICATIONS | 第18-20页 |
III MATERIALS AND METHODS | 第20-40页 |
III.1. ANIMALS | 第21页 |
III.2. CLONING OF THE FULL LENGTH cDNA ENCODING ApLC | 第21-24页 |
III.2.1. PURIFICATION OF RNA | 第21-22页 |
III.2.2. QUANTIFICATION OF RNA/DNA | 第22页 |
III.2.3. RT-PCR FOR PREPARATION OF FIRST STRAND cDNA | 第22-23页 |
III.2.4. AMPLIFICATION OF ApLC FULL FROM FIRST STRAND cDNA | 第23-24页 |
III.2.4.1. PRIMER DESIGN AND PREPARATION | 第23-24页 |
III.2.4.2. PCR COMPONENTS | 第24页 |
III.2.4.3. PCR CONDITIONS | 第24页 |
III.3. PURIFICATION OF THE AMPLIFIED cDNA | 第24-25页 |
III.4. LIGATION OF ApLC | 第25页 |
III.5. TRANSFORMATION | 第25-26页 |
III.6. INSERT CHECK AND CLONING OF THE TRANSFORMED E.COLI | 第26页 |
III.7. SEQUENCE ANALYSIS AND PHYLOGENETIC TREE CONSTRUCTION | 第26-27页 |
III.8. FAR SOUTHERN BLOTTING | 第27-31页 |
III.8.1. AMPLIFICATION AND LABELING OF THE PROBE | 第27页 |
III.8.2. PREPARATION OF SOLUTIONS FOR FAR-SOUTHEN BLOTTING | 第27-29页 |
III.8.3. PERFORMING THE FAR-SOUTHERN BLOTTING | 第29-31页 |
III.8.3.1. Washings of loaded gel | 第30页 |
III.8.3.2. Transferring of DNA onto membrane and probe hybridization | 第30页 |
III.8.3.3. Washing of membrane and signal detection | 第30-31页 |
III.9. RECOMBINANT EXPRESSION OF ApLC | 第31-34页 |
III.9.1. Construction of the expression plasmid | 第31页 |
III.9.2. Expression of ApLC | 第31-32页 |
III.9.3. Purification of ApLC | 第32-34页 |
III.9.3.1. Preparation of buffers | 第32-33页 |
III.9.3.2. Purification | 第33-34页 |
III.10. SDS-Polyacrylamide Electrophoresis(SDS-PAGE) | 第34-37页 |
III.10.1. Reagents preparation | 第34-35页 |
III.10.2. Performing the SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis | 第35-37页 |
III.11. HEMAGGLUTINATION ASSAY | 第37-38页 |
III.12. STUDY OF FACTORS MODULATING ApLC ACTIVITY | 第38页 |
III.13. CARBOHYDRATES INDIRECT BINDING ASSAY OF ApLC | 第38-39页 |
III.14. BACTERIAAGGLUTINATION TEST | 第39页 |
III.15. ANTIMICROBIAL ACTIVITY ASSAY | 第39-40页 |
IV. RESULTS | 第40-67页 |
IV 1.cDNA CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF ApLC | 第41-43页 |
IV 2.HOMOLOGOUS AND PHYLOGENETIC ANALYSIS OF ApLC | 第43-45页 |
IV 3.BODYPARTS EXPRESSION OF ApLC | 第45-47页 |
IV.4. EXPRESSION OF ApLC AFTER BACTERIA CHALLENGE | 第47-53页 |
IV.5. EXPRESSION AND PURIFICATION OF RECOMBINANT ApLC | 第53-54页 |
IV.6. HEMAGGLUTINATION ASSAY | 第54-55页 |
IV 7.SUGAR SPECIFICITY ASSAY | 第55页 |
IV.8. DEPENDANCE OF ApLC ACTIVITY ON PH DIVALENT CATIONS AND TEMPERATURE | 第55-57页 |
IV 9.BACTERIA-AGGLUTINATION ACTIVITY OF ApLC | 第57-62页 |
IV 10.ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF ApLC | 第62-67页 |
VI. CONCLUSION | 第67-69页 |
VII. REFERENCES | 第69-79页 |