| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1. 文献综述 | 第8-21页 |
| 1.1 玉米生产概况和我国玉米育种生产所面临的问题 | 第8-9页 |
| 1.2 分子育种技术在玉米育种工作中的应用 | 第9-10页 |
| 1.3 细菌人工染色体的研究和应用 | 第10-21页 |
| 1.3.1 细菌人工染色体的构建和发展 | 第12-16页 |
| 1.3.2 细菌人工染色体的应用 | 第16-21页 |
| 1.3.2.1 基因的图位克隆 | 第17-19页 |
| 1.3.2.2 基因组物理图谱构建 | 第19页 |
| 1.3.2.3 基因组测序 | 第19-20页 |
| 1.3.2.4 基因组或特异染色体文库的构建 | 第20页 |
| 1.3.2.5 BAC-FISH 的应用 | 第20页 |
| 1.3.2.6 遗传转化 | 第20-21页 |
| 2. 引言 | 第21-23页 |
| 2.1 技术路线 | 第22-23页 |
| 3. 材料与方法 | 第23-34页 |
| 3.1 实验材料 | 第23页 |
| 3.2 试验方法 | 第23-28页 |
| 3.2.1 高纯度、高分子量细胞核DNA 的制备 | 第23-28页 |
| 3.2.1.1 细胞核的分离 | 第23-24页 |
| 3.2.1.2 胶块的制备 | 第24页 |
| 3.2.1.3 少量酶切寻找最佳酶切条件 | 第24页 |
| 3.2.1.4 基因组DNA 大量酶切 | 第24-25页 |
| 3.2.1.5 处理透析袋 | 第25页 |
| 3.2.1.6 洗脱大片段DNA | 第25页 |
| 3.2.1.7 DNA 片段与载体连接 | 第25-26页 |
| 3.2.1.8 连接产物的脱盐 | 第26页 |
| 3.2.1.9 连接产物的电击转化 | 第26页 |
| 3.2.1.10 BAC 文库的保存 | 第26-27页 |
| 3.2.1.11 BAC 文库的质量检测 | 第27页 |
| 3.2.1.12 BAC 混合池的制备 | 第27-28页 |
| 3.3 恢复基因Rf4 区域BAC 克隆的筛选 | 第28-29页 |
| 3.3.1 玉米自交系87-1 BAC 混合池 | 第28页 |
| 3.3.2 PCR 反应体系及循环参数 | 第28-29页 |
| 3.3.3 对筛出的克隆进行长度鉴定 | 第29页 |
| 3.4 结果与分析 | 第29-34页 |
| 3.4.1 高质量玉米自交系87-1 基因组DNA 胶块的制备 | 第29页 |
| 3.4.2 部分酶切条件的确定 | 第29-30页 |
| 3.4.3 大片段DNA 的回收 | 第30页 |
| 3.4.4 连接转化 | 第30-31页 |
| 3.4.5 BAC 文库的质量检测 | 第31页 |
| 3.4.6 BAC 混合池的制备 | 第31页 |
| 3.4.7 玉米恢复基因Rf4 位点阳性BAC 克隆的筛选 | 第31-34页 |
| 4. 讨论与结论 | 第34-37页 |
| 4.1 讨论 | 第34-36页 |
| 4.1.1 部分酶切条件的确定 | 第34页 |
| 4.1.2 高分子量基因组DNA 片段的获得 | 第34-35页 |
| 4.1.3 影响转化效率的因素 | 第35页 |
| 4.1.4 PCR 筛选的特点 | 第35-36页 |
| 4.1.5 PCR 筛选引物的来源 | 第36页 |
| 4.2 结论 | 第36-37页 |
| 4.2.1 玉米自交系87-1BAC 文库的构建 | 第36页 |
| 4.2.2 玉米恢复基因Rf4 区域BAC 克隆的筛选 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-44页 |
| 附录 | 第44-48页 |
| Abstract | 第48-49页 |
