| 中文摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 缩略语 | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 结核病的危害 | 第10-11页 |
| 1.2 结核分枝杆菌抗药性的产生 | 第11-12页 |
| 1.3 MarR家族转录因子及其与细菌药物抗性 | 第12-15页 |
| 1.4 药物外排蛋白与细菌药物抗性 | 第15-18页 |
| 1.5 本课题的研究背景及意义 | 第18-19页 |
| 1.6 本课题的研究内容及目标 | 第19-20页 |
| 2 实验材料和方法 | 第20-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第20-21页 |
| 2.1.2 抗生素及培养基 | 第21页 |
| 2.1.3 实验所用质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.4 酶、试剂和试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.5 PCR反应引物 | 第22-24页 |
| 2.1.6 缓冲液及试剂配制 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-33页 |
| 2.2.1 PCR扩增反应 | 第25页 |
| 2.2.2 分子生物学基本操作 | 第25页 |
| 2.2.3 细菌单杂交实验 | 第25-26页 |
| 2.2.4 蛋白质的表达纯化和透析 | 第26页 |
| 2.2.5 凝胶迁移率实验 | 第26-27页 |
| 2.2.6 基因敲除及Southern blot验证 | 第27-28页 |
| 2.2.7 染色质免疫共沉淀实验 | 第28-29页 |
| 2.2.8 DNaseI足迹实验 | 第29-30页 |
| 2.2.9 β-半乳糖苷酶活性测定实验 | 第30-31页 |
| 2.2.10 qRT-PCR | 第31页 |
| 2.2.11 耻垢分枝杆菌生长曲线的测定 | 第31页 |
| 2.2.12 高效液相色谱 | 第31-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-56页 |
| 3.1 Ms6508是一个MarR家族转录因子 | 第33-35页 |
| 3.2 Ms6508能够结合自身启动子 | 第35-44页 |
| 3.2.1 细菌单杂交实验证明Ms6508能够结合自身启动子 | 第35-37页 |
| 3.2.2 EMSA实验进一步证明Ms6508与自身启动子的特异性结合 | 第37-40页 |
| 3.2.3 Ms6508基因的敲除及验证 | 第40-42页 |
| 3.2.4 ChIP实验验证Ms6508与靶启动子的结合 | 第42-43页 |
| 3.2.5 水杨酸抑制Ms6508与自身启动子的结合 | 第43-44页 |
| 3.3 DNaseI足迹实验鉴定Ms6508识别的保守核酸序列模体 | 第44-47页 |
| 3.4 Ms6508负调控其所在操纵子的表达 | 第47-49页 |
| 3.5 Ms6508调控耻垢分枝杆菌对药物的抗性 | 第49-56页 |
| 3.5.1 超表达Ms6508增加了菌株对RIF的抗性和对INH的敏感性 | 第49-51页 |
| 3.5.2 Ms6509-Ms6510基因共表达使菌株对RIF更加敏感 | 第51-53页 |
| 3.5.3 Ms6509-Ms6510基因共表达促进RIF更多地进入细胞 | 第53-56页 |
| 4 总结与讨论 | 第56-59页 |
| 4.1 总结 | 第56-57页 |
| 4.2 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录 | 第66-72页 |
