| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 缩略语 | 第14-15页 |
| 第一篇 文献综述 传染性法氏囊病病毒研究概况 | 第15-37页 |
| 1 传染性法氏囊病概况 | 第15-16页 |
| 2 传染性法氏囊病的病原学特性 | 第16-21页 |
| 2.1 形态特点和理化特性 | 第16-17页 |
| 2.2 基因组结构与编码蛋白 | 第17-20页 |
| 2.2.1 VP1蛋白 | 第17-18页 |
| 2.2.2 VP2蛋白 | 第18-19页 |
| 2.2.3 VP3蛋白 | 第19页 |
| 2.2.4 VP4蛋白 | 第19页 |
| 2.2.5 VP5蛋白 | 第19-20页 |
| 2.3 IBDV培养特性 | 第20-21页 |
| 2.3.1 IBDV在鸡胚上的增殖 | 第20页 |
| 2.3.2 IBDV在细胞上的增殖 | 第20-21页 |
| 3 IBDV抗原变异和毒力差异的分子基础 | 第21-22页 |
| 3.1 IBDV抗原变异的分子基础 | 第21页 |
| 3.2 IBDV毒力变化的分子基础 | 第21-22页 |
| 4 分子流行病学研究 | 第22页 |
| 5 传染性法氏囊病的诊断 | 第22-24页 |
| 5.1 病毒分离 | 第22页 |
| 5.2 免疫学检测技术 | 第22-24页 |
| 5.2.1 病毒中和试验 | 第22-23页 |
| 5.2.2 琼脂扩散试验 | 第23页 |
| 5.2.3 荧光抗体试验 | 第23页 |
| 5.2.4 酶联免疫吸附试验 | 第23页 |
| 5.2.5 胶体金免疫层析试纸条检测技术 | 第23-24页 |
| 5.2.6 其他免疫学技术 | 第24页 |
| 5.3 分子生物学检测技术 | 第24页 |
| 6 IBD的防治 | 第24-27页 |
| 6.1 防制措施 | 第24-25页 |
| 6.2 疫苗研制现状 | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-37页 |
| 第二篇 试验研究 | 第37-97页 |
| 第一章 华东区域传染性法氏囊病病毒流行株的分离及其生物学特性分析 | 第37-55页 |
| 1 材料和方法 | 第38-40页 |
| 1.1 材料 | 第38页 |
| 1.2 病毒分离 | 第38-39页 |
| 1.2.1 病料处理 | 第38-39页 |
| 1.2.2 在鸡胚中的传代 | 第39页 |
| 1.2.3 在细胞上的传代 | 第39页 |
| 1.3 病毒对鸡的致病性 | 第39页 |
| 1.4 vp2基因序列测定与分析 | 第39-40页 |
| 1.4.1 vp2基因序列测定 | 第39-40页 |
| 1.4.2 vp2基因序列分析 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-50页 |
| 2.1 病毒分离 | 第40-43页 |
| 2.1.1 在鸡胚中的传代 | 第40-41页 |
| 2.1.2 在细胞上的传代 | 第41-43页 |
| 2.2 病毒对鸡的致病性 | 第43-46页 |
| 2.3 vp2基因序列测定与分析 | 第46-50页 |
| 2.3.1 vp2基因序列测定 | 第46-47页 |
| 2.3.2 遗传进化树分析 | 第47-49页 |
| 2.3.3 vp2序列特征性氨基酸位点分析 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 第二章 分泌传染性法氏囊病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 | 第55-71页 |
| 1 材料与方法 | 第56-61页 |
| 1.1 主要材料与试剂 | 第56页 |
| 1.2 抗原的制备 | 第56-57页 |
| 1.2.1 IBDV病毒抗原的制备 | 第56页 |
| 1.2.2 重组VP2蛋白抗原的制备 | 第56-57页 |
| 1.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第57-59页 |
| 1.3.1 免疫动物 | 第57页 |
| 1.3.2 饲养细胞的制备 | 第57页 |
| 1.3.3 SP2/0骨髓瘤细胞的制备 | 第57页 |
| 1.3.4 脾淋巴细胞的制备 | 第57页 |
| 1.3.5 细胞融合 | 第57-58页 |
| 1.3.6 杂交瘤细胞的筛选 | 第58-59页 |
| 1.4 单克隆抗体的大量制备与纯化 | 第59页 |
| 1.4.1 腹水的制备 | 第59页 |
| 1.4.2 腹水抗体的纯化 | 第59页 |
| 1.5 单克隆抗体的鉴定 | 第59-61页 |
| 1.5.1 抗体效价测定 | 第59-60页 |
| 1.5.2 亚类测定 | 第60页 |
| 1.5.3 特异性鉴定 | 第60页 |
| 1.5.4 间接免疫荧光试验 | 第60页 |
| 1.5.5 western-blot实验 | 第60页 |
| 1.5.6 单克隆抗体中和活性分析 | 第60-61页 |
| 1.5.7 分泌抗体稳定性测定 | 第61页 |
| 2 结果 | 第61-67页 |
| 2.1 抗原的制备 | 第61页 |
| 2.1.1 IBDV病毒抗原的制备 | 第61页 |
| 2.1.2 重组vp2蛋白抗原的制备 | 第61页 |
| 2.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第61-62页 |
| 2.3 腹水的纯化 | 第62-63页 |
| 2.4 单克隆抗体的鉴定 | 第63-67页 |
| 2.4.1 抗体亚类测定 | 第63页 |
| 2.4.2 单克隆抗体效价测定结果 | 第63-64页 |
| 2.4.3 分泌抗体稳定性测定 | 第64页 |
| 2.4.4 特异性鉴定 | 第64页 |
| 2.4.5 间接免疫荧光试验 | 第64-66页 |
| 2.4.6 western-blot分析 | 第66页 |
| 2.4.7 病毒中和试验(Reed-Muench法) | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-71页 |
| 第三章 传染性法氏囊病病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立 | 第71-83页 |
| 1 材料与方法 | 第72-75页 |
| 1.1 主要试剂 | 第72页 |
| 1.2 病毒 | 第72页 |
| 1.3 腹水的纯化 | 第72页 |
| 1.4 单克隆抗体的标记 | 第72-73页 |
| 1.5 捕获抗体和酶标抗体工作浓度的优化 | 第73页 |
| 1.6 夹心ELISA试验条件的优化 | 第73-74页 |
| 1.6.1 包被条件的优化 | 第73页 |
| 1.6.2 封闭液及封闭时间的优化 | 第73页 |
| 1.6.3 抗原作用时间的优化 | 第73-74页 |
| 1.6.4 酶标抗体作用时间的优化 | 第74页 |
| 1.7 夹心ELISA判定标准的确定 | 第74页 |
| 1.8 特异性检验 | 第74页 |
| 1.9 敏感性检验 | 第74页 |
| 1.10 重复性检验 | 第74-75页 |
| 1.10.1 批内重复性检验 | 第74页 |
| 1.10.2 批间重复性检验 | 第74-75页 |
| 1.11 临床样品检测 | 第75页 |
| 2 结果 | 第75-78页 |
| 2.1 捕获抗体和酶标抗体工作浓度的优化 | 第75页 |
| 2.2 夹心ELISA试验条件的优化 | 第75-77页 |
| 2.2.1 包被条件的优化 | 第75-76页 |
| 2.2.2 封闭液及封闭时间的优化 | 第76页 |
| 2.2.3 抗原作用时间的优化 | 第76-77页 |
| 2.2.4 酶标抗体作用时间的优化 | 第77页 |
| 2.3 夹心ELISA判定标准的确定 | 第77页 |
| 2.4 特异性检验 | 第77页 |
| 2.5 敏感性检验 | 第77-78页 |
| 2.6 重复性检验 | 第78页 |
| 2.7 临床样品检测 | 第78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
| 第四章 传染性法氏囊病病毒单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的制备 | 第83-97页 |
| 1 材料和方法 | 第84-88页 |
| 1.1 病毒 | 第84页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第84页 |
| 1.3 玻璃器皿的处理 | 第84页 |
| 1.4 不同颗粒大小胶体金溶液的制备 | 第84-85页 |
| 1.5 胶体金与抗体的标记 | 第85-86页 |
| 1.5.1 金标记抗体最适pH值的确定 | 第85页 |
| 1.5.2 金标记抗体最适蛋白浓度的确定 | 第85页 |
| 1.5.3 胶体金-抗体复合物的制备 | 第85-86页 |
| 1.6 试纸条的优化 | 第86-87页 |
| 1.6.1 检测抗体和质控抗体最佳包被浓度的确定 | 第86页 |
| 1.6.2 NC膜封闭条件的优化 | 第86页 |
| 1.6.3 胶体金最佳颗粒大小的确定 | 第86页 |
| 1.6.4 胶体金最佳重悬液的确定 | 第86-87页 |
| 1.6.5 金标抗体最佳包被浓度确定 | 第87页 |
| 1.7 试纸条的组装 | 第87页 |
| 1.8 免疫胶体金检测试纸的使用和结果判定 | 第87-88页 |
| 1.9 试纸条特性鉴定 | 第88页 |
| 1.9.1 特异性鉴定 | 第88页 |
| 1.9.2 敏感性鉴定 | 第88页 |
| 1.9.3 重复性及稳定性实验 | 第88页 |
| 1.10 临床样品检测 | 第88页 |
| 2 结果 | 第88-93页 |
| 2.1 胶体金溶液的制备 | 第88-89页 |
| 2.2 金标记抗体最适pH的确定 | 第89页 |
| 2.3 金标记抗体最适蛋白浓度的确定 | 第89-90页 |
| 2.4 试纸条的优化 | 第90-91页 |
| 2.4.1 检测抗体和质控抗体最佳包被浓度的确定 | 第90页 |
| 2.4.2 NC膜封闭条件的优化 | 第90页 |
| 2.4.3 胶体金最佳颗粒大小的确定 | 第90页 |
| 2.4.4 胶体金最佳重悬液的确定 | 第90-91页 |
| 2.4.5 金标抗体最佳包被浓度确定 | 第91页 |
| 2.5 试纸条特性鉴定 | 第91-93页 |
| 2.5.1 特异性鉴定 | 第91-92页 |
| 2.5.2 敏感性鉴定 | 第92-93页 |
| 2.5.3 重复性及稳定性实验 | 第93页 |
| 2.6 临床样品检测 | 第93页 |
| 3 讨论 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-97页 |
| 全文总结 | 第97-99页 |
| 附录: 常用试剂的配制 | 第99-103页 |
| 致谢 | 第103-105页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第105页 |
