| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 猪链球菌概述 | 第10页 |
| 1.2 猪链球菌毒力因子的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.2.1 荚膜多糖（CPS） | 第10-11页 |
| 1.2.2 分选酶A（SrtA） | 第11-12页 |
| 1.2.3 双组份调控系统（TCS） | 第12页 |
| 1.2.4 Rgg转录因子 | 第12-13页 |
| 1.2.5 表面抗原Sao蛋白 | 第13页 |
| 1.2.6 孤儿反应调节因子（CovR） | 第13-14页 |
| 1.3 金属蛋白酶研究进展 | 第14-18页 |
| 1.3.1 金属蛋白酶的研究概况 | 第14-15页 |
| 1.3.2 金属蛋白酶的结构 | 第15页 |
| 1.3.3 金属蛋白酶家族及其糖基化 | 第15-17页 |
| 1.3.4 金属蛋白酶对细菌毒力的影响 | 第17-18页 |
| 1.4 病原菌免疫逃避机制研究进展 | 第18-21页 |
| 1.4.1 逃避宿主天然性免疫应答 | 第18页 |
| 1.4.2 病原菌在巨噬细胞中的免疫逃避策略 | 第18-19页 |
| 1.4.3 侵入中枢神经系统（CNS） | 第19页 |
| 1.4.4 补体的激活和逃避 | 第19-20页 |
| 1.4.5 通过细胞毒素加速吞噬细胞死亡 | 第20-21页 |
| 2 本研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-37页 |
| 3.1 材料 | 第22-29页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和培养条件 | 第22-25页 |
| 3.1.2 主要药品、试剂、试剂盒与仪器 | 第25页 |
| 3.1.3 主要培养基及抗生素配制 | 第25-26页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第26-28页 |
| 3.1.5 动物和细胞 | 第28页 |
| 3.1.6 引物 | 第28-29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-37页 |
| 3.2.1 重组质粒的构建与鉴定 | 第29页 |
| 3.2.2 突变株的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.2.1 猪链球菌2型的电转化 | 第29-30页 |
| 3.2.2.2 突变株的筛选鉴定 | 第30页 |
| 3.2.3 生长曲线的测定 | 第30页 |
| 3.2.4 革兰氏染色 | 第30-31页 |
| 3.2.5 溶血活性实验 | 第31页 |
| 3.2.6 全血杀菌实验 | 第31页 |
| 3.2.7 细胞粘附实验 | 第31-32页 |
| 3.2.7.1 PK15细胞粘附实验 | 第31-32页 |
| 3.2.7.2 Hela细胞粘附实验 | 第32页 |
| 3.2.8 CD1小鼠毒力实验 | 第32页 |
| 3.2.8.1 存活曲线的测定 | 第32页 |
| 3.2.8.2 组织载菌量的测定 | 第32页 |
| 3.2.8.3 组织病理切片的观察 | 第32页 |
| 3.2.9 蛋白HP2082在猪链球菌2型中的定位 | 第32-35页 |
| 3.2.9.1 表达质粒的构建与鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.9.2 蛋白质的表达、纯化与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.9.3 免疫血清的制备及其效价的检测 | 第34页 |
| 3.2.9.4 蛋白质印迹（Western Blot） | 第34-35页 |
| 3.2.9.5 蛋白HP2082在猪链球菌2型中的定位 | 第35页 |
| 3.2.10 补体激活实验 | 第35-36页 |
| 3.2.11 补体作用下的全血杀菌实验 | 第36页 |
| 3.2.12 直接结合实验 | 第36页 |
| 3.2.13 C1q作用下的细胞粘附实验 | 第36-37页 |
| 3.2.13.1 人脑微血管内皮细胞（HBMEC）粘附入侵实验 | 第36-37页 |
| 3.2.13.2 鼠脑微血管内皮细胞（b.End3）粘附入侵实验 | 第37页 |
| 3.2.14 统计分析 | 第37页 |
| 4 实验结果与分析 | 第37-50页 |
| 4.1 重组质粒pSET4s-2082的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| 4.2 突变株△ SSU05_2082的筛选鉴定 | 第38-39页 |
| 4.3 生长曲线的测定 | 第39-40页 |
| 4.4 革兰氏染色结果 | 第40页 |
| 4.5 溶血活性实验 | 第40-41页 |
| 4.6 全血杀菌实验 | 第41页 |
| 4.7 细胞粘附实验 | 第41-42页 |
| 4.8 CD1小鼠毒力实验 | 第42-44页 |
| 4.8.1 存活曲线的测定 | 第42页 |
| 4.8.2 组织载菌量的测定 | 第42-44页 |
| 4.8.3 组织病理切片的观察 | 第44页 |
| 4.9 蛋白HP2082在猪链球菌2型中的定位 | 第44-46页 |
| 4.9.1 表达载体的构建与鉴定 | 第44-45页 |
| 4.9.2 蛋白质的表达、纯化及Western Blot检测结果 | 第45-46页 |
| 4.9.3 免疫血清效价的检测 | 第46页 |
| 4.9.4 蛋白HP2082在猪链球菌2型中的定位 | 第46页 |
| 4.10 补体激活实验 | 第46-47页 |
| 4.11 补体作用下的全血杀菌实验 | 第47-48页 |
| 4.12 直接结合实验 | 第48-49页 |
| 4.13 C1q作用下的细胞粘附实验 | 第49-50页 |
| 5 讨论 | 第50-53页 |
| 5.1 蛋白HP2082对猪链球菌2型毒力的影响 | 第50页 |
| 5.2 组织载菌量测定时间点的选取 | 第50-51页 |
| 5.3 补体在病原菌感染过程中的作用 | 第51页 |
| 5.4 通过与补体蛋白C1q互作的方法探索猪链球菌的免疫逃避机制 | 第51-52页 |
| 5.5 对后续工作的展望 | 第52-53页 |
| 6 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
