| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 常用英文缩写 | 第10-16页 |
| 第1章 前言 | 第16-20页 |
| 第2章 实验材料 | 第20-24页 |
| 1 主要实验仪器 | 第20-21页 |
| 2 载体、菌株及细胞株 | 第21页 |
| 3 主要实验试剂 | 第21-24页 |
| 3.1 主要试剂盒 | 第21页 |
| 3.2 主要实验试剂 | 第21-22页 |
| 3.3 培养基及溶液 | 第22页 |
| 3.4 其他 | 第22-24页 |
| 第3章 实验方法 | 第24-38页 |
| 1 目的基因Tipα的扩增 | 第24-26页 |
| 1.1 H. pylori26695标准株的培养与其全基因组DNA模板的提取 | 第24页 |
| 1.2 目的基因Tipα的引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| 1.3 PCR扩增目的基因Tipα | 第25页 |
| 1.4 纯化目的基因PCR产物 | 第25-26页 |
| 2 构建Tipα原核表达载体 | 第26-29页 |
| 2.1 p ET-30 a (+)质粒的扩增与纯化 | 第26页 |
| 2.2 目的基因Tipα和p ET-30 a (+)质粒的双酶切 | 第26-27页 |
| 2.3 目的基因Tipα和p ET-30a(+)质粒的连接 | 第27页 |
| 2.4 制备感受态细菌 | 第27-28页 |
| 2.5 连接产物的转化 | 第28页 |
| 2.6 重组质粒的筛选与鉴定 | 第28-29页 |
| 3 Tipα重组蛋白的表达、鉴定和纯化 | 第29-34页 |
| 3.1 Tipα重组蛋白的诱导表达 | 第29-31页 |
| 3.2 Tipα重组蛋白的Western Blot鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3 Tipα重组蛋白的大规模诱导表达和纯化 | 第32-33页 |
| 3.4 Tipα重组蛋白去内毒素 | 第33页 |
| 3.5 蛋白浓度的测定 | 第33-34页 |
| 4 THP-1 细胞培养和模型建立 | 第34页 |
| 4.1 THP-1 细胞培养 | 第34页 |
| 4.2 THP-1 细胞诱导成巨噬细胞的模型建立 | 第34页 |
| 5 ELISA检测促炎细胞因子TNF-α、IL-18 和IL-1β水平 | 第34-35页 |
| 5.1 TNF-α的检测 | 第34-35页 |
| 5.2 IL-18 的检测 | 第35页 |
| 5.3 IL-1β的检测 | 第35页 |
| 6 ELISA检测阻断信号通路后对各促炎细胞因子表达的影响 | 第35页 |
| 7 Western Blot检测阻断信号通路前后NLRP3、Caspase-1 的表达变化 | 第35-38页 |
| 7.1 已刺激巨噬细胞的收集和处理 | 第35-36页 |
| 7.2 Western Blot检测 | 第36-38页 |
| 第4章 实验结果 | 第38-52页 |
| 1 Tipα重组蛋白的诱导表达与鉴定 | 第38-47页 |
| 1.1 Tipα基因的PCR扩增结果 | 第38页 |
| 1.2 重组质粒p ET30a(+)/Tipα的菌液PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 1.3 重组质粒p ET30a(+)/Tipα的双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 1.4 基因比对分析 | 第40-41页 |
| 1.5 Tipα/p ET30a(+)重组质粒在大肠杆菌BL21中的诱导表达和鉴定 | 第41-45页 |
| 1.6 Tipα重组蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 1.7 Tipα重组蛋白的浓度测定 | 第46页 |
| 1.8 Tipα重组蛋白的鉴定 | 第46-47页 |
| 2 Tipα刺激对THP-1 细胞分泌细胞因子的影响 | 第47-48页 |
| 3 PDTC对Tipα诱导巨噬细胞分泌促炎细胞因子以及表达Caspase-1 和NLRP3的影响 | 第48-50页 |
| 4 NAC对促炎细胞因子的分泌及Caspase-1 和NLRP3的表达的影响 | 第50-52页 |
| 第5章 讨论 | 第52-56页 |
| 第6章 结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 文献综述 | 第62-70页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
| 发表的论文与参与课题 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
