| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| 1.1 α-葡糖苷酶的研究现状 | 第14-17页 |
| 1.1.1 α-葡糖苷酶的定义与来源 | 第14页 |
| 1.1.2 α-葡糖苷酶的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.3 α-葡糖苷酶的催化原理 | 第15-17页 |
| 1.2 α-葡糖苷酶在生产中的重要应用 | 第17-18页 |
| 1.2.1 工业生产低聚异麦芽糖 | 第17页 |
| 1.2.2 嗜热 α-葡糖苷酶在酒精生产中的应用 | 第17页 |
| 1.2.3 催化合成糖基化产物 | 第17-18页 |
| 1.2.4 α-葡糖苷酶抑制剂治疗糖尿病 | 第18页 |
| 1.3 α-葡糖苷酶HaG的研究背景 | 第18-21页 |
| 1.4 研究生物大分子的最重要方法——蛋白质单晶X射线衍射 | 第21-26页 |
| 1.4.1 结构生物学的研究方法 | 第21-23页 |
| 1.4.2 单晶XRD解析蛋白质立体结构 | 第23-26页 |
| 1.4.3 蛋白质结晶学的重要意义 | 第26页 |
| 1.5 本论文的研究背景和研究内容 | 第26-30页 |
| 1.5.1 研究背景 | 第26-29页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第29页 |
| 1.5.3 研究意义 | 第29-30页 |
| 第二章 α-葡糖苷酶 HaG 的体外表达及其分离纯化 | 第30-47页 |
| 2.1 引言 | 第30-31页 |
| 2.2 实验仪器及材料 | 第31-32页 |
| 2.2.1 仪器设备 | 第31页 |
| 2.2.2 主要实验材料与试剂 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-38页 |
| 2.3.1 HaG的异源表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.2 HaG重组蛋白的诱导表达与大量制备 | 第33-35页 |
| 2.3.3 渗透休克法提取周质蛋白 | 第35-36页 |
| 2.3.4 阴离子交换柱层析分离重组蛋白 | 第36-37页 |
| 2.3.5 分子排阻色谱纯化重组蛋白 | 第37-38页 |
| 2.3.6 高纯度重组蛋白的透析 | 第38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-46页 |
| 2.4.1 HaG的蛋白质序列分析 | 第38-40页 |
| 2.4.2 HaG重组蛋白诱导表达检验 | 第40-42页 |
| 2.4.3 HaG重组蛋白的分离纯化 | 第42-46页 |
| 2.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 葡糖苷酶HaG的蛋白质单晶制备研究 | 第47-56页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验仪器及材料 | 第47-48页 |
| 3.2.1 仪器设备 | 第47-48页 |
| 3.2.2 主要实验材料与试剂 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-50页 |
| 3.3.1 结晶前蛋白质样品的准备 | 第48-49页 |
| 3.3.2 HaG蛋白质结晶条件初筛 | 第49页 |
| 3.3.3 In-house X射线衍射初步鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.4 HaG蛋白质结晶条件的优化与高质量晶体的制备 | 第50页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第50-55页 |
| 3.4.1 结晶初筛结果 | 第50-52页 |
| 3.4.2 X射线衍射初步鉴定 | 第52-54页 |
| 3.4.3 HaG蛋白质结晶条件的优化结果与单晶鉴定 | 第54-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 野生型 HaG 晶体的衍射数据采集和结构解析 | 第56-75页 |
| 4.1 引言 | 第56-57页 |
| 4.2 实验仪器及材料 | 第57-58页 |
| 4.2.1 仪器设备 | 第57页 |
| 4.2.2 主要实验材料与试剂 | 第57-58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-63页 |
| 4.3.1 蛋白晶体的冻结 | 第58-59页 |
| 4.3.2 HaG蛋白晶体X射线衍射的数据采集 | 第59-60页 |
| 4.3.3 HaG蛋白质晶体数据处理 | 第60-61页 |
| 4.3.4 分子置换法确定HaG蛋白质结构的相位 | 第61-62页 |
| 4.3.5 HaG蛋白质结构的优化 | 第62页 |
| 4.3.6 HaG蛋白质结构的分析与图片绘制 | 第62-63页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第63-74页 |
| 4.4.1 HaG蛋白质晶体的数据采集 | 第63-64页 |
| 4.4.2 HaG蛋白分子结构解析过程 | 第64-68页 |
| 4.4.3 野生型HaG蛋白质的立体结构分析 | 第68-74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-75页 |
| 第五章 α-葡糖苷酶突变体建构、表达及其复合体晶体制备与结构解析 | 第75-96页 |
| 5.1 引言 | 第75-76页 |
| 5.2 实验仪器及材料 | 第76-77页 |
| 5.2.1 仪器设备 | 第76页 |
| 5.2.2 主要实验材料与试剂 | 第76-77页 |
| 5.3 实验方法 | 第77-81页 |
| 5.3.1 活性缺失突变体的制备 | 第77-78页 |
| 5.3.2 复合体晶体筛选与制备 | 第78-79页 |
| 5.3.3 HaG及其突变体的复合体晶体的数据采集及处理 | 第79-80页 |
| 5.3.4 HaG及其突变体的复合体结构解析 | 第80-81页 |
| 5.3.5 圆二色谱测定突变体二级结构的无序程度 | 第81页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第81-94页 |
| 5.4.1 复合体晶体的制备 | 第81-82页 |
| 5.4.2 复合体晶体的结构解析 | 第82-85页 |
| 5.4.3 复合体立体结构分析 | 第85-94页 |
| 5.5 本章小结 | 第94-96页 |
| 第六章 HaG 的底物特异性和催化机理的分子机制 | 第96-112页 |
| 6.1 引言 | 第96页 |
| 6.2 实验仪器及材料 | 第96-97页 |
| 6.2.1 仪器设备 | 第96页 |
| 6.2.2 主要实验材料与试剂 | 第96-97页 |
| 6.3 实验方法 | 第97-100页 |
| 6.3.1 HaG片段缺失突变体的制备 | 第97-98页 |
| 6.3.2 HaG片段缺失突变体（HaG-LD）的酶活测定 | 第98-99页 |
| 6.3.3 HaG复合体与其他糖苷水解酶的结构对比 | 第99-100页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第100-110页 |
| 6.4.1 HaG片段缺失突变体的制备过程 | 第100-102页 |
| 6.4.2 HaG片段缺失突变体的酶学性质分析 | 第102-104页 |
| 6.4.3 HaG底物特异性的结构学分析 | 第104-108页 |
| 6.4.4 α-葡糖苷酶HaG催化反应机理分析 | 第108-110页 |
| 6.5 本章小结 | 第110-112页 |
| 结论与展望 | 第112-116页 |
| 参考文献 | 第116-126页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第126-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 附件 | 第128页 |
