| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 引言 | 第12-13页 |
| 1.2 脊椎动物IFITM基因家族的同源性 | 第13页 |
| 1.3 IFITM基因家族的蛋白结构和细胞分布 | 第13-14页 |
| 1.4 IFITM基因家族的表达 | 第14页 |
| 1.5 IFITM抗病毒功能及研究进展 | 第14-20页 |
| 1.5.1 IFITM抗病毒功能 | 第14-19页 |
| 1.5.1.1 IFITM与流感病毒 | 第15-16页 |
| 1.5.1.2 IFITM与西尼罗河、登革热、裂谷热病毒 | 第16-17页 |
| 1.5.1.3 IFITM与肝炎病毒 | 第17-18页 |
| 1.5.1.4 IFITM与马尔堡、埃博拉、SARS冠状病毒 | 第18页 |
| 1.5.1.5 IFITM与人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-Ⅰ) | 第18-19页 |
| 1.5.2 IFITM抗病毒机理研究进展 | 第19-20页 |
| 1.6 鸡源IFITM的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.7 IFITM与呼肠孤病毒(ARV) | 第21-22页 |
| 1.8 研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 试验部分 | 第24-69页 |
| 试验一 黄羽肉鸡IFITM3基因克隆、原核表达和多克隆抗体制备 | 第24-42页 |
| 1 序言 | 第24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 菌种和载体 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 样品采集与处理 | 第25-26页 |
| 2.2.2 黄羽肉鸡IFITM3基因的扩增 | 第26页 |
| 2.2.3 黄羽肉鸡IFITM3基因的克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.4 黄羽肉鸡IFITM3原核表达载体的构建及重组蛋白的表达与纯化 | 第27-29页 |
| 2.2.4.1 黄羽肉鸡IFITM3原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.4.2 黄羽肉鸡IFITM3重组蛋白的表达与纯化 | 第28页 |
| 2.2.4.3 黄羽肉鸡IFITM3重组蛋白的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.5 抗血清的制备 | 第29页 |
| 2.2.6 目的蛋白免疫印迹鉴定 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-40页 |
| 3.1 黄羽肉鸡IFITM3基因克隆 | 第30-32页 |
| 3.2 黄羽肉鸡IFITM3基因序列分析 | 第32-33页 |
| 3.3 黄羽肉鸡IFITM3氨基酸序列预测及蛋白质性质分析 | 第33-36页 |
| 3.4 黄羽肉鸡IFITM3原核表达载体的构建及重组蛋白的表达与纯化 | 第36-39页 |
| 3.4.1 黄羽肉鸡IFITM3原核表达载体构建 | 第36-37页 |
| 3.4.2 黄羽肉鸡IFITM3重组质粒的自动诱导表达与蛋白的纯化 | 第37-39页 |
| 3.5 抗鸡IFITM3阳性血清的制备及蛋白免疫印迹 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 4.1 黄羽肉鸡IFITM3基因克隆、序列分析、氨基酸序列预测及蛋白质性质分析 | 第40页 |
| 4.2 黄羽肉鸡IFITM3原核表达载体的构建及重组蛋白的表达与纯化 | 第40-41页 |
| 4.3 抗鸡IFITM3阳性血清的制备及蛋白免疫印迹 | 第41-42页 |
| 试验二 IFITM3蛋白在黄羽肉鸡消化器官和免疫器官中的分布研究 | 第42-51页 |
| 1 序言 | 第42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-46页 |
| 2.1 材料 | 第42-43页 |
| 2.1.1 动物、病毒与试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第43页 |
| 2.2 方法 | 第43-46页 |
| 2.2.1 样品采集与处理 | 第43页 |
| 2.2.2 免疫组化法初步定位 | 第43-44页 |
| 2.2.3 RT-PCR检测IFITM3在鸡免疫器官和消化器官中的分布 | 第44-45页 |
| 2.2.4 SYBR Green实时定量PCR | 第45-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-50页 |
| 3.1 黄羽肉鸡IFITM3在消化器官分布免疫组化初步定位 | 第46-47页 |
| 3.2 RT-PCR检测IFITM3在黄羽肉鸡免疫器官和消化器官中的分布 | 第47-48页 |
| 3.3 SYBR-PCR检测IFITM3在黄羽肉鸡免疫器官和消化器官中的分布 | 第48-50页 |
| 3.3.1 熔解曲线的分析 | 第48-49页 |
| 3.3.2 黄羽肉鸡IFITM3的表达分析 | 第49-50页 |
| 4 小结与讨论 | 第50-51页 |
| 试验三 IFITM3蛋白抑制ARV复制的初步研究 | 第51-69页 |
| 1 序言 | 第51页 |
| 2 材料与方法 | 第51-59页 |
| 2.1 材料 | 第51-52页 |
| 2.1.1 动物 | 第51页 |
| 2.1.2 细胞与毒株 | 第51-52页 |
| 2.1.3 材料与试剂 | 第52页 |
| 2.1.4 试验仪器 | 第52页 |
| 2.2 方法 | 第52-59页 |
| 2.2.1 ARV人工感染雏鸡和鸡成纤维细胞IFITM3、IFNα和ARV在免疫器官中表达量的变化 | 第52-54页 |
| 2.2.1.1 ARV人工感染雏鸡 | 第52-53页 |
| 2.2.1.2 ARV人工感染雏鸡成纤维细胞IFITM3表达量的变化 | 第53-54页 |
| 2.2.2 干扰素诱导鸡胚成纤维细胞IFITM3的表达及对ARV复制的影响 | 第54-58页 |
| 2.2.3 RNA干扰下调IFITM3的表达对ARV复制的影响 | 第58-59页 |
| 2.2.3.1 细胞培养和转染 | 第58页 |
| 2.2.3.2 RT-PCR检测IFITM3和ARV基因的表达 | 第58-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-67页 |
| 3.1 荧光定量PCR引物筛选 | 第59-60页 |
| 3.2 ARV人工感染雏鸡和鸡胚成纤维细胞IFITM3表达量的变化 | 第60-64页 |
| 3.2.1 ARV人工感染雏鸡IFITM3表达量的变化 | 第60-63页 |
| 3.2.2 ARV人工感染鸡成纤维细胞IFITM3表达量的变化 | 第63-64页 |
| 3.3 干扰素诱导鸡胚成纤维细胞IFITM3的表达及对ARV复制的影响 | 第64-66页 |
| 3.4 RNA干扰下调IFITM3的表达对ARV复制的影响 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 第三章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附表 | 第77-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
