| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第19-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-47页 |
| 1.1 癌症的认识 | 第23-26页 |
| 1.2 化疗药物在癌症方面的研究现状 | 第26-27页 |
| 1.3 纳米药物在癌症方面的研究现状 | 第27-30页 |
| 1.4 癌症转移的认识 | 第30-31页 |
| 1.5 传统的CTCs分离及检测手段 | 第31-33页 |
| 1.6 纳米技术在CTCs检测方面的研究进展 | 第33-39页 |
| 1.7 多抗体联合运用技术在CTCs检测方面的研究现状 | 第39-41页 |
| 1.8 本研究的思路及侧重点 | 第41-45页 |
| 1.9 本文研究的理论与实际意义 | 第45-47页 |
| 第二章 PAMAM-单/双靶向抗体络合物的合成及表征 | 第47-67页 |
| 2.1 仪器和试剂 | 第51-54页 |
| 2.1.1 仪器 | 第51-53页 |
| 2.1.2 材料和试剂 | 第53-54页 |
| 2.2 实验方法 | 第54-56页 |
| 2.2.1 PAMAM衍生物的合成 | 第54页 |
| 2.2.2 PAMAM-单/双抗体络合物的合成 | 第54-55页 |
| 2.2.3 荧光标记的PAMAM-单/双抗体络合物的合成 | 第55页 |
| 2.2.4 单/双抗体包被的功能化基质的制备 | 第55-56页 |
| 2.2.4.1 羧基化PAMAM对基质表面的修饰 | 第55页 |
| 2.2.4.2 单/双抗体对PAMAM包被的基质表面的修饰 | 第55-56页 |
| 2.3 实验结果 | 第56-65页 |
| 2.3.1 PAMAM衍生物的命名及表征 | 第56-59页 |
| 2.3.2 PAMAM-单/双抗体络合物的命名及表征 | 第59-63页 |
| 2.3.2.1 PAMAM衍生物中荧光素及络合物中抗体数目的确定 | 第60-62页 |
| 2.3.2.2 荧光标记的PAMAM-双抗络合物的荧光图谱鉴定 | 第62-63页 |
| 2.3.3 基质表面功能化修饰的结果分析 | 第63-65页 |
| 2.3.3.1 荧光图谱分析 | 第63-64页 |
| 2.3.3.2 元素分析 | 第64-65页 |
| 2.4 讨论 | 第65页 |
| 2.5 小结 | 第65-67页 |
| 第三章 PAMAM-单/双靶向抗体络合物的理化性质表征及生物稳定性测试 | 第67-73页 |
| 3.1 仪器和试剂 | 第67-68页 |
| 3.1.1 仪器 | 第67页 |
| 3.1.2 试剂和材料 | 第67-68页 |
| 3.2 实验方法 | 第68-69页 |
| 3.2.1 PAMAM衍生物及络合物的水溶性直径和电势测定 | 第68页 |
| 3.2.2 PAMAM-单/双抗体络合物的形貌及粒径表征 | 第68页 |
| 3.2.3 PAMAM-单/双抗体络合物的体外稳定性测试 | 第68-69页 |
| 3.3 实验结果 | 第69-72页 |
| 3.3.1 PAMAM衍生物及络合物的水溶性直径和电势分布 | 第69-70页 |
| 3.3.2 PAMAM-单/双抗体络合物的形貌及粒径分析 | 第70-71页 |
| 3.3.3 PAMAM-单/双抗体络合物的稳定性分析 | 第71-72页 |
| 3.4 讨论 | 第72页 |
| 3.5 小结 | 第72-73页 |
| 第四章 PAMAM-单/双靶向抗体络合物体外静态识别、结合和捕获结肠癌细胞的研究 | 第73-89页 |
| 4.1 仪器和耗材 | 第74-77页 |
| 4.1.1 仪器 | 第74-75页 |
| 4.1.2 材料和试剂 | 第75-76页 |
| 4.1.3 细胞株 | 第76-77页 |
| 4.2 细胞培养 | 第77页 |
| 4.3 流式操作 | 第77-78页 |
| 4.4 实验方法 | 第78-79页 |
| 4.4.1 PAMAM-单/双抗体络合物无干扰细胞存在下对结肠癌细胞的识别、结合和捕获研究 | 第78-79页 |
| 4.4.1.1 激光共聚焦分析络合物对贴壁细胞的识别和结合能力 | 第78页 |
| 4.4.1.2 荧光显微和流式分析络合物对悬浮细胞的识别和捕获能力 | 第78-79页 |
| 4.4.2 PAMAM-单/双抗体络合物干扰细胞存在下对结肠癌细胞的识别、结合和捕获研究 | 第79页 |
| 4.5 实验结果 | 第79-86页 |
| 4.5.1 PAMAM-单/双抗体络合物无干扰细胞存在下对结肠癌细胞的结合和捕获能力分析 | 第79-83页 |
| 4.5.1.1 荧光图谱分析被络合物结合的贴壁结肠癌细胞 | 第79-81页 |
| 4.5.1.2 显微和流式图谱分析被络合物捕获的悬浮结肠癌细胞 | 第81-83页 |
| 4.5.2 PAMAM-单/双抗体络合物干扰细胞存在下对结肠癌细胞的捕获能力分析 | 第83-86页 |
| 4.5.2.1 控制HT29和干扰细胞总数目为106/管,探讨络合物对HT29的捕获能力 | 第83-85页 |
| 4.5.2.2 控制HT29数目为1000/管,探讨络合物对HT29的捕获能力 | 第85-86页 |
| 4.6 讨论 | 第86-88页 |
| 4.6.1 干扰细胞对PAMAM-单/双抗络合物捕获HT29能力的影响 | 第86-87页 |
| 4.6.2 PAMAM-单/双抗络合物相同条件下捕获HT29能力的差异 | 第87页 |
| 4.6.3 讨论造成上述捕获能力差异的原因 | 第87-88页 |
| 4.6.4 阐述PAMAM-双抗络合物捕获靶细胞的优势 | 第88页 |
| 4.7 小结 | 第88-89页 |
| 第五章 PAMAM-单/双靶向抗体络合物体外对结肠癌细胞活性的调控研究 | 第89-105页 |
| 5.1 仪器和材料 | 第89-92页 |
| 5.1.1 仪器 | 第89-90页 |
| 5.1.2 材料和试剂 | 第90-91页 |
| 5.1.3 细胞株 | 第91-92页 |
| 5.2 实验方法 | 第92-95页 |
| 5.2.1 细胞培养 | 第92页 |
| 5.2.2 MTT检测细胞活性 | 第92-93页 |
| 5.2.3 PI单染检测细胞周期相分布 | 第93页 |
| 5.2.4 DAPI染色鉴定细胞的形态变化 | 第93页 |
| 5.2.5 AO/EB染色鉴定细胞的凋亡状况 | 第93-94页 |
| 5.2.6 DiOC6(3)染色检测线粒体膜电位变化 | 第94页 |
| 5.2.7 Annexin V-FITC/PI染色定量检测细胞凋亡 | 第94-95页 |
| 5.3 实验结果 | 第95-102页 |
| 5.3.1 细胞活性测试结果 | 第95-97页 |
| 5.3.1.1 络合物对不同细胞株活性的影响 | 第95-96页 |
| 5.3.1.2 PAMAM-单/双抗络合物对HT29活性的调控能力 | 第96-97页 |
| 5.3.2 细胞周期相分布结果 | 第97-98页 |
| 5.3.3 DAPI染色后的细胞显微图谱分析 | 第98-99页 |
| 5.3.4 AO/EB染色后的细胞显微图谱分析 | 第99-100页 |
| 5.3.5 流式分析细胞线粒体膜电位的变化结果 | 第100-101页 |
| 5.3.6 流式定量检测细胞的凋亡状态 | 第101-102页 |
| 5.4 讨论 | 第102-103页 |
| 5.4.1 同一络合物对不同细胞系列调控能力差异的原因分析 | 第102页 |
| 5.4.2 PAMAM-单/双抗络合物抑制HT29生长能力差异的原因分析 | 第102-103页 |
| 5.4.3 PAMAM-单/双抗络合物对HT29周期相分布、形态及膜电位的影响 | 第103页 |
| 5.4.4 PAMAM-单/双抗络合物抑制HT29细胞活性的原因分析 | 第103页 |
| 5.5 小结 | 第103-105页 |
| 第六章 PAMAM-单/双靶向抗体络合物体外干预结肠癌细胞粘附的研究 | 第105-123页 |
| 6.1 仪器和材料 | 第106-108页 |
| 6.1.1 仪器 | 第106-107页 |
| 6.1.2 试剂和材料 | 第107-108页 |
| 6.1.3 细胞株 | 第108页 |
| 6.2 细胞培养 | 第108-109页 |
| 6.2.1 癌细胞培养 | 第108页 |
| 6.2.2 HUVECs的分离和培养 | 第108-109页 |
| 6.3 实验方法 | 第109-111页 |
| 6.3.1 PAMAM-单/双抗络合物对结肠癌细胞系列增殖的影响 | 第109-110页 |
| 6.3.2 PAMAM-单/双抗络合物干预结肠癌细胞系列粘附于人工基质膜的研究 | 第110页 |
| 6.3.2.1 Fn包被的人工基质膜的构建 | 第110页 |
| 6.3.2.2 PAMAM-单/双抗络合物对结肠癌细胞系列-基质间粘附的干预研究 | 第110页 |
| 6.3.3 PAMAM-单/双抗络合物干预结肠癌细胞系列粘附于HUVECs的研究 | 第110-111页 |
| 6.4 实验结果 | 第111-121页 |
| 6.4.1 PAMAM-单/双抗络合物对结肠癌细胞系列的活性抑制作用 | 第111-115页 |
| 6.4.2 PAMAM-单/双抗络合物对结肠癌细胞系列粘附于人工基质膜的干预作用 | 第115-117页 |
| 6.4.3 PAMAM-单/双抗络合物对结肠癌细胞系列粘附于HUVECs的干预作用 | 第117-121页 |
| 6.5 讨论 | 第121-122页 |
| 6.5.1 PAMAM-单/双抗络合物抗结肠癌细胞粘附于人工基质膜能力的差异 | 第121-122页 |
| 6.5.2 PAMAM-单/双抗络合物抗结肠癌细胞粘附于HUVECs能力的差异 | 第122页 |
| 6.5.3 PAMAM-单/双抗络合物抗粘附能力差异的原因分析 | 第122页 |
| 6.6 小结 | 第122-123页 |
| 第七章 PAMAM-单/双靶向抗体络合物识别、结合和捕获结肠癌病人血中微量CTCs的研究 | 第123-131页 |
| 7.1 仪器和耗材 | 第123-125页 |
| 7.1.1 仪器 | 第123-124页 |
| 7.1.2 试剂和耗材 | 第124-125页 |
| 7.2 实验方法 | 第125-126页 |
| 7.2.1 流式分析临床样本CTCs的捕获情况 | 第125-126页 |
| 7.2.2 荧光分析临床样本CTCs的捕获情况 | 第126页 |
| 7.3 实验结果 | 第126-129页 |
| 7.3.1 定量分析PAMAM-单/双抗络合物对病人血中CTCs的捕获效率 | 第126-128页 |
| 7.3.2 定性分析PAMAM-单/双抗络合物对病人血中CTCs的捕获情况 | 第128-129页 |
| 7.4 讨论 | 第129-130页 |
| 7.5 小结 | 第130-131页 |
| 第八章 PAMAM-单/双靶向抗体络合物体内动态识别、结合和捕获结肠癌细胞的研究 | 第131-139页 |
| 8.1 仪器和耗材 | 第131-133页 |
| 8.1.1 仪器 | 第131-132页 |
| 8.1.2 试剂和材料 | 第132-133页 |
| 8.1.3 细胞株 | 第133页 |
| 8.2 细胞培养 | 第133-134页 |
| 8.3 动物饲养 | 第134页 |
| 8.4 实验方法 | 第134-135页 |
| 8.4.1 体内结肠癌CTCs模型的建立 | 第134页 |
| 8.4.2 PAMAM-单/双抗络合物体内捕获CTCs的过程 | 第134-135页 |
| 8.4.3 定性/定量分析PAMAM-单/双抗络合物的体内动态捕获效率 | 第135页 |
| 8.5 实验结果 | 第135-138页 |
| 8.5.1 显微定性分析PAMAM-单/双抗络合物对体内CTCs的捕获情况 | 第135-137页 |
| 8.5.2 流式定量分析PAMAM-单/双抗络合物对体内CTCs的动态捕获效率 | 第137-138页 |
| 8.6 讨论 | 第138页 |
| 8.7 小结 | 第138-139页 |
| 第九章 PAMAM-单/双靶向抗体络合物体外静态识别、结合和捕获肝癌细胞的研究 | 第139-153页 |
| 9.1 仪器和耗材 | 第140-143页 |
| 9.1.1 仪器 | 第140-141页 |
| 9.1.2 材料和试剂 | 第141-143页 |
| 9.1.3 细胞培养 | 第143页 |
| 9.1.4 血样获取 | 第143页 |
| 9.2 实验方法 | 第143-145页 |
| 9.2.1 PAMAM-单/双抗络合物体外无干扰细胞存在下对HepG2的识别、结合和捕获研究 | 第143-144页 |
| 9.2.1.1 荧光分析PAMAM-单/双抗络合物对贴壁HepG2的识别和结合能力 | 第143页 |
| 9.2.1.2 荧光和流式分析PAMAM-单/双抗络合物对悬浮HepG2的识别和捕获能力 | 第143-144页 |
| 9.2.2 PAMAM-单/双抗络合物体外干扰细胞存在下对HepG2的识别、结合和捕获研究 | 第144-145页 |
| 9.2.2.1 控制HepG2和干扰细胞总数目为10~6/管,探讨络合物对HepG2的捕获能力 | 第144页 |
| 9.2.2.2 控制HepG2数目为1000/管,探讨络合物对HepG2的捕获能力 | 第144-145页 |
| 9.3 实验结果 | 第145-151页 |
| 9.3.1 PAMAM-单/双抗络合物体外对HepG2的识别、结合和捕获结果 | 第145-147页 |
| 9.3.1.1 激光共聚焦图谱分析PAMAM-单/双抗络合物对贴壁HepG2的结合 | 第145-146页 |
| 9.3.1.2 荧光显微图谱和流式分析PAMAM-单/双抗络合物对悬浮HepG2的捕获 | 第146-147页 |
| 9.3.2 PAMAM-单/双抗络合物体外干扰细胞存在下对HepG2的识别、结合和捕获结果 | 第147-151页 |
| 9.3.2.1 控制HepG2和干扰细胞总数目为106/管,探讨PAMAM-单/双抗络合物对HepG2捕获能力的差异 | 第147-150页 |
| 9.3.2.2 控制HepG2数目为1000/管,探讨PAMAM-单/双抗络合物对HepG2捕获能力的差异 | 第150-151页 |
| 9.4 讨论 | 第151-152页 |
| 9.4.1 比较PAMAM-单/双抗络合物相同条件下对HepG2识别和捕获能力的不同 | 第151页 |
| 9.4.2 比较相同络合物有无其它细胞干扰下对HepG2识别和捕获能力的不同 | 第151页 |
| 9.4.3 比较相同条件下同一络合物对不同癌细胞株HepG2和HT29识别和捕获能力的差异 | 第151-152页 |
| 9.4.4 讨论造成上述识别和捕获能力不同的原因 | 第152页 |
| 9.5 小结 | 第152-153页 |
| 第十章 PAMAM-单/双靶向抗体络合物对肝癌细胞活性的调控研究 | 第153-165页 |
| 10.1 仪器和材料 | 第153-155页 |
| 10.1.1 仪器 | 第153-154页 |
| 10.1.2 试剂和材料 | 第154-155页 |
| 10.1.3 细胞培养 | 第155页 |
| 10.2 实验方法 | 第155-157页 |
| 10.2.1 MTT测试细胞活力 | 第155-156页 |
| 10.2.2 PI单染检测细胞周期相分布 | 第156页 |
| 10.2.3 DAPI染色观察细胞的形态变化 | 第156页 |
| 10.2.4 AO/EB染色检测细胞的凋亡状态 | 第156-157页 |
| 10.2.5 DiOC6(3)染色检测线粒体膜电位变化 | 第157页 |
| 10.2.6 Annexin V-FITC/PI染色定量检测细胞凋亡 | 第157页 |
| 10.3 实验结果 | 第157-163页 |
| 10.3.1 PAMAM-单/双抗络合物对HepG2活性的影响 | 第157-158页 |
| 10.3.2 PAMAM-单/双抗络合物对细胞各周期相分布的影响 | 第158-159页 |
| 10.3.3 荧光图谱分析DAPI染色后的细胞形态变化 | 第159-161页 |
| 10.3.4 荧光图谱分析AO/EB染色后的细胞凋亡状态 | 第161-162页 |
| 10.3.5 流式定量检测络合物作用后的细胞凋亡状态 | 第162页 |
| 10.3.6 流式分析络合物作用后的细胞线粒体膜电位变化 | 第162-163页 |
| 10.4 讨论 | 第163-164页 |
| 10.4.1 PAMAM-单/双抗络合物抑制HepG2生长能力差异的原因 | 第163-164页 |
| 10.4.2 PAMAM-单/双抗络合物对HepG2周期相分布、形态、膜电位影响的差异 | 第164页 |
| 10.4.3 分析PAMAM-单/双抗络合物改变HepG2细胞活性的原因 | 第164页 |
| 10.5 小结 | 第164-165页 |
| 第十一章 PAMAM-单双靶向抗体络合物识别、捕获肝癌病人血中CTCs的研究 | 第165-171页 |
| 11.1 仪器和耗材 | 第165-167页 |
| 11.1.1 仪器 | 第165页 |
| 11.1.2 试剂和耗材 | 第165-167页 |
| 11.1.3 细胞培养 | 第167页 |
| 11.2 实验方法 | 第167-168页 |
| 11.3 实验结果 | 第168-169页 |
| 11.4 讨论 | 第169页 |
| 11.5 结论 | 第169-171页 |
| 参考文献 | 第171-183页 |
| 全文总结 | 第183-185页 |
| 创新性分析 | 第185-187页 |
| 附件 | 第187-193页 |
| 荣誉和奖励 | 第193-195页 |
| 作者简介 | 第195-197页 |
| 致谢 | 第197-198页 |
