| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 1 绪论 | 第11-17页 |
| 1.1 课题研究背景 | 第11页 |
| 1.2 SIRT7研究进展 | 第11-14页 |
| 1.2.1 SIRT7基因及其功能简介 | 第11-13页 |
| 1.2.2 SIRT7与癌症关系 | 第13-14页 |
| 1.3 本课题研究目的及主要内容 | 第14-15页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第14-15页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第15页 |
| 1.4 本课题创新之处和局限性 | 第15-17页 |
| 2 SIRT7敲除型MCF-7 细胞系构建及功能研究 | 第17-46页 |
| 2.1 引言 | 第17-20页 |
| 2.2 材料和方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 细胞株与菌株、质粒 | 第20页 |
| 2.2.2 主要仪器及来源 | 第20-21页 |
| 2.2.3 主要试剂及来源 | 第21-23页 |
| 2.2.4 主要试剂配制 | 第23-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-39页 |
| 2.3.1 SIRT7基因sgRNA的设计及敲除型载体的构建 | 第27-30页 |
| 2.3.2 细胞复苏、培养及保存 | 第30-31页 |
| 2.3.3 细胞转染及筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.4 细胞总蛋白提取和western blot检测 | 第32-34页 |
| 2.3.5 单克隆细胞筛选及稳定细胞系验证 | 第34-35页 |
| 2.3.6 基因组测序验证细胞敲除 | 第35-36页 |
| 2.3.7 细胞克隆形成实验 | 第36页 |
| 2.3.8 细胞周期测量 | 第36-37页 |
| 2.3.9 RNA提取及Real-Time PCR | 第37-39页 |
| 2.3.10 统计学分析 | 第39页 |
| 2.4 结果 | 第39-44页 |
| 2.4.1 载体的构建及鉴定 | 第39页 |
| 2.4.2 单克隆稳定细胞系构建 | 第39-40页 |
| 2.4.3 基因组测序验证 | 第40-42页 |
| 2.4.4 MCF-7 细胞敲除SIRT7影响细周期 | 第42-44页 |
| 2.4.5 SIRT7敲除后影响p53 mRNA和蛋白水平 | 第44页 |
| 2.5 讨论 | 第44-45页 |
| 2.6 小结 | 第45-46页 |
| 3 TRIM25调控SIRT7蛋白稳定性分子机制研究 | 第46-61页 |
| 3.1 引言 | 第46-48页 |
| 3.2 材料与试剂 | 第48-49页 |
| 3.2.1 主要仪器与设备 | 第48页 |
| 3.2.2 主要试剂和试剂盒 | 第48-49页 |
| 3.3 方法 | 第49-55页 |
| 3.3.1 构建SIRT7和TRIM25标签质粒 | 第49-54页 |
| 3.3.2 蛋白组学和免疫共沉淀检测SIRT7和TRIM25蛋白作用关系 | 第54页 |
| 3.3.3 CHX处理细胞检测TRIM25对SIRT7的作用 | 第54-55页 |
| 3.3.4 细胞总RNA提取、RT-qPCR检测 | 第55页 |
| 3.3.5 体内检测TRIM25对SIRT7的泛素化作用 | 第55页 |
| 3.3.6 统计学分析 | 第55页 |
| 3.4 结果 | 第55-59页 |
| 3.4.1 SIRT7和TRIM25相互作用 | 第55-57页 |
| 3.4.2 TRIM25下调SIRT7蛋白稳定性 | 第57-58页 |
| 3.4.3 TRIM25调节SIRT7蛋白泛素化 | 第58-59页 |
| 3.5 讨论 | 第59-60页 |
| 3.6 小结 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录 | 第67页 |
| 作者在读期间研究成果 | 第67页 |
