| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 Sir2研究进展 | 第13-18页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1 Sir2蛋白的发现和命名 | 第13-14页 |
| 2 Sir2蛋白的结构特征和酶活性 | 第14页 |
| 3 Sir2蛋白的功能 | 第14-17页 |
| ·Sir2与染色体沉默 | 第15页 |
| ·Sir2与能量限制 | 第15-16页 |
| ·Sir2与生物长寿 | 第16页 |
| ·Sir2与癌变 | 第16-17页 |
| ·Sir2与神经系统保护 | 第17页 |
| 4 展望 | 第17-18页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第18-20页 |
| 1 研究的目的与意义 | 第18页 |
| 2 研究内容 | 第18-19页 |
| 3 实验流程图 | 第19-20页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第20-28页 |
| 1 生物信息学工具 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20页 |
| 3 结果 | 第20-26页 |
| ·BmSir2核苷酸序列及预测的蛋白序列 | 第20-22页 |
| ·疏水性分析 | 第22页 |
| ·BmSir2亚细胞定位分析 | 第22-23页 |
| ·BmSir2二级结构预测 | 第23页 |
| ·BmSir2三级结构预测 | 第23-24页 |
| ·BmSir2同源性分析 | 第24-25页 |
| ·进化树分析 | 第25-26页 |
| 4 结论 | 第26-28页 |
| 第四章 原核表达、纯化 | 第28-41页 |
| 1 材料与试剂 | 第28-30页 |
| ·材料与设备 | 第28页 |
| ·试剂 | 第28-29页 |
| ·常用试剂配方 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| ·BmSir2基因重组质粒的构建 | 第30-33页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第33页 |
| ·pET-28a(+)-BmSir2的诱导表达和纯化 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白表达鉴定 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白BmSir2镍柱纯化 | 第35页 |
| ·融合蛋白的FPLC纯化 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白质谱鉴定 | 第36页 |
| 3 实验结果 | 第36-40页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第36页 |
| ·重组质粒PCR和酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·BmSir2重组蛋白表达及鉴定 | 第37-38页 |
| ·FPLC分离纯化 | 第38-39页 |
| ·质谱鉴定 | 第39-40页 |
| 4 实验结论 | 第40-41页 |
| 第五章 多克隆抗体制备、纯化及检测 | 第41-50页 |
| 1 试剂与材料 | 第41-43页 |
| ·材料与设备 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·常用试剂配方 | 第41-43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第43-44页 |
| ·抗原制备 | 第44页 |
| ·免疫动物 | 第44页 |
| ·多克隆抗体血清的制备 | 第44-46页 |
| 3 实验结果 | 第46-49页 |
| ·抗体纯化 | 第46-47页 |
| ·抗体效价测定ELISA结果 | 第47-48页 |
| ·Western Blot检测抗体特异性 | 第48-49页 |
| 4 结论与讨论 | 第49-50页 |
| 第六章 家蚕BmSir2表达分析 | 第50-54页 |
| 1 材料与试剂 | 第50-51页 |
| ·材料与设备 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·常用试剂配方 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-52页 |
| ·家蚕各时期及各组织蛋白提取 | 第51页 |
| ·Western blot检测BmSir2蛋白在家蚕各发育时期的分布 | 第51页 |
| ·Western blot检测BmSir2在五龄幼虫各组织中分布 | 第51-52页 |
| 3 实验结果 | 第52页 |
| ·家蚕BmSir2各发育时期表达情况 | 第52页 |
| ·五龄幼虫各组织中BmSir2表达情况 | 第52页 |
| 4 结论与讨论 | 第52-54页 |
| 第七章 BmSir2蛋白亚细胞定位 | 第54-57页 |
| 1 材料与试剂 | 第54-55页 |
| ·材料与仪器 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·试剂的配制 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55页 |
| 3 实验结果 | 第55-56页 |
| 4 结论与讨论 | 第56-57页 |
| 总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
