| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 肝损伤的研究背景 | 第12页 |
| 1.2 肝损伤与肝细胞死亡 | 第12-17页 |
| 1.2.1 线粒体与肝损伤 | 第13-14页 |
| 1.2.2 Bcl-2、Bax与肝损伤 | 第14-15页 |
| 1.2.3 Fas/Fasl系统与肝损伤 | 第15-16页 |
| 1.2.4 保肝药物与肝损伤 | 第16-17页 |
| 1.3 肝细胞生长刺激因子的生物学背景 | 第17页 |
| 1.4 肝细胞生长因子 | 第17-23页 |
| 1.4.1 HGF的结构及理化特性 | 第18页 |
| 1.4.2 HGF的基因表达与受体 | 第18-19页 |
| 1.4.3 HGF的生物学特性 | 第19-22页 |
| 1.4.3.1 HGF与肝再生 | 第20页 |
| 1.4.3.2 HGF抗纤维化作用 | 第20-21页 |
| 1.4.3.3 HGF对肿瘤的作用 | 第21-22页 |
| 1.4.3.4 HGF对其他器官组织的作用 | 第22页 |
| 1.4.4 HGF的临床应用与前景 | 第22-23页 |
| 1.5 促肝细胞生长因子(PHGF)的发现 | 第23-27页 |
| 1.5.1 PHGF的结构及理化特性 | 第23-24页 |
| 1.5.2 PHGF的生物学特性 | 第24-25页 |
| 1.5.3 PHGF其他生物学作用的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.5.4 PHGF的临床应用与前景 | 第26-27页 |
| 第二章 促肝细胞生长素对CCl_4诱导的肝损伤小鼠肝脏的保护作用和机制研究 | 第27-46页 |
| 前言 | 第27-28页 |
| 2.1 材料和主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验动物和细胞株 | 第28页 |
| 2.1.2 主要实验药品及试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 PHGF质量标准研究 | 第29-30页 |
| 2.2.1.1 PHGF分子量电泳分析 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 PHGF生物学活性检测 | 第30页 |
| 2.2.2 实验动物分组 | 第30页 |
| 2.2.3 实验动物造模 | 第30-31页 |
| 2.2.4 标本采集 | 第31页 |
| 2.2.5 小鼠血清ALT和AST检测 | 第31页 |
| 2.2.6 病理组织学检查 | 第31页 |
| 2.2.7 免疫组化法检测小鼠肝组织Bcl-2与Bax的表达 | 第31-32页 |
| 2.2.7.1 石蜡切片制作 | 第31-32页 |
| 2.2.7.2 免疫组化法检测小鼠肝组织Bax和Bcl-2的表达 | 第32页 |
| 2.2.8 Western blot法检测小鼠肝组织Bcl-2与Bax蛋白的表达 | 第32-35页 |
| 2.2.8.1 肝组织蛋白样品制备 | 第32-33页 |
| 2.2.8.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第33页 |
| 2.2.8.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33页 |
| 2.2.8.4 转膜 | 第33-34页 |
| 2.2.8.5 封闭 | 第34页 |
| 2.2.8.6 孵育一抗 | 第34页 |
| 2.2.8.7 洗膜 | 第34页 |
| 2.2.8.8 孵育二抗 | 第34页 |
| 2.2.8.9 洗膜 | 第34页 |
| 2.2.8.10 ECL化学显影 | 第34-35页 |
| 2.3 试验结果 | 第35-44页 |
| 2.3.1 PHGF分子量电泳分析结果 | 第35页 |
| 2.3.2 PHGF生物学活性检测 | 第35-36页 |
| 2.3.3 小鼠血清ALT与AST检测结果 | 第36-37页 |
| 2.3.4 小鼠肝组织HE染色检测结果 | 第37-39页 |
| 2.3.5 小鼠肝组织Bcl-2与Bax免疫组化染色结果 | 第39-42页 |
| 2.3.6 小鼠肝组织Bcl-2与Bax蛋白的表达Western blot检测结果 | 第42-44页 |
| 2.3.6.1 标准曲线 | 第42-43页 |
| 2.3.6.2 蛋白浓度计算 | 第43页 |
| 2.3.6.3 Western blot实验结果 | 第43-44页 |
| 2.4 结论 | 第44-46页 |
| 第三章 促肝细胞生长素对H_2O_2诱导的LO2细胞凋亡的保护作用和机制研究 | 第46-62页 |
| 前言 | 第46页 |
| 3.1 材料和主要仪器 | 第46-48页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第46页 |
| 3.1.2 主要实验药品及试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第47-48页 |
| 3.2 方法 | 第48-54页 |
| 3.2.1 细胞的培养 | 第48页 |
| 3.2.2 MTT法检测PHGF对正常LO2细胞的影响 | 第48页 |
| 3.2.3 H_2O_2浓度的确定 | 第48-49页 |
| 3.2.4 细胞模型的建立 | 第49页 |
| 3.2.5 MTT法检测PHGF对H_2O_2诱导的LO2细胞增殖的影响 | 第49-50页 |
| 3.2.6 PHGF对H_2O_2诱导的LO2细胞凋亡的影响 | 第50-52页 |
| 3.2.6.1 Hoechst染色 | 第50-51页 |
| 3.2.6.2 流式细胞术基本原理 | 第51页 |
| 3.2.6.3 流式细胞术实验步骤 | 第51页 |
| 3.2.6.4 流式细胞术结果判断 | 第51-52页 |
| 3.2.7 Western blot法检测PHGF对H_2O_2诱导的LO2细胞Bcl-2与Bax蛋白的表达 | 第52-54页 |
| 3.2.7.1 LO2细胞蛋白样品制备 | 第52页 |
| 3.2.7.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第52-53页 |
| 3.2.7.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第53页 |
| 3.2.7.4 转膜 | 第53页 |
| 3.2.7.5 封闭 | 第53页 |
| 3.2.7.6 孵育一抗 | 第53页 |
| 3.2.7.7 洗膜 | 第53页 |
| 3.2.7.8 孵育二抗 | 第53页 |
| 3.2.7.9 洗膜 | 第53-54页 |
| 3.2.7.10 ECL化学显影 | 第54页 |
| 3.3 试验结果 | 第54-61页 |
| 3.3.1 PHGF对正常LO2细胞的影响 | 第54页 |
| 3.3.2 H_2O_2浓度的确定 | 第54-55页 |
| 3.3.3 PHGF对H_2O_2诱导的LO2细胞增殖率的影响 | 第55-56页 |
| 3.3.4 PHGF对H_2O_2诱导LO2细胞凋亡的影响 | 第56-59页 |
| 3.3.4.1 Hoechst染色结果 | 第56-57页 |
| 3.3.4.2 流式细胞术结果 | 第57-59页 |
| 3.3.5 PHGF对H_2O_2诱导LO2细胞Bcl-2与Bax蛋白表达Western blot检测结果 | 第59-61页 |
| 3.3.5.1 标准曲线 | 第59页 |
| 3.3.5.2 蛋白浓度计算 | 第59-60页 |
| 3.3.5.3 Western blot实验结果 | 第60-61页 |
| 3.4 结论 | 第61-62页 |
| 第四章 讨论与结论 | 第62-70页 |
| 4.1 讨论 | 第62-69页 |
| 4.1.1 肝损伤模型 | 第62页 |
| 4.1.2 CCl_4所致肝损伤背景介绍 | 第62-63页 |
| 4.1.3 PHGF对CCl_4所致肝损伤模型的实验研究 | 第63-65页 |
| 4.1.3.1 PHGF | 第63-64页 |
| 4.1.3.2 PHGF对CCl_4所致化学性肝损伤小鼠肝细胞的保护作用 | 第64页 |
| 4.1.3.3 PHGF对不同给药组小鼠肝组织Bcl-2与Bax蛋白表达的影响 | 第64-65页 |
| 4.1.4 PHGF对H_2O_2诱导的LO_2细胞凋亡的影响 | 第65-69页 |
| 4.1.4.1 H_2O_2与细胞凋亡 | 第65-66页 |
| 4.1.4.2 PHGF对正常LO2细胞的影响 | 第66-67页 |
| 4.1.4.3 MTT法检测PHGF对H2O_2诱导的LO2细胞凋亡的影响 | 第67页 |
| 4.1.4.4 PHGF对LO2细胞凋亡的影响 | 第67-68页 |
| 4.1.4.5 PHGF对不同给药组LO2细胞Bcl-2与Bax蛋白表达的影响 | 第68-69页 |
| 4.2 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第78页 |
