| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 对虾常见病原的介绍 | 第12-15页 |
| 1.1.1 白斑综合征病毒(white spot syndrome virus, WSSV) | 第12-13页 |
| 1.1.2 传染性皮下及造血组织坏死病毒 (infectious hypodermal andhematopoietic necrosis virus, IHHNV) | 第13页 |
| 1.1.3 传染性肌肉坏死病毒(infectious myonecrosis virus，IMNV) | 第13-14页 |
| 1.1.4 桃拉病毒(taura syndrome virus，TSV) | 第14页 |
| 1.1.5 黄头病毒(yellow head virus，YHV) | 第14-15页 |
| 1.2 急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND) | 第15-16页 |
| 1.2.1 急性肝胰腺坏死病的简介 | 第15-16页 |
| 1.2.2 急性肝胰腺坏死病的检测方法 | 第16页 |
| 1.3 虾血细胞虹彩病毒(shrimp hemocyte iridescent virus，SHIV) | 第16-18页 |
| 1.3.1 虹彩病毒简介 | 第16-17页 |
| 1.3.2 虹彩病毒的诊断与检测方法 | 第17-18页 |
| 1.3.2.1 电镜观察 | 第17-18页 |
| 1.3.2.2 PCR技术 | 第18页 |
| 1.4 人工感染试验 | 第18-19页 |
| 1.5 组织病理学观察 | 第19页 |
| 1.6 实时荧光定量PCR | 第19-20页 |
| 1.7 本研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 凡纳滨对虾感染VP_(AHPND)的定量分析 | 第22-35页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第22页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 实验用对虾的病原检测 | 第23-24页 |
| 2.1.5 重组质粒pVpPirA-1构建 | 第24-25页 |
| 2.1.6 标准曲线制作 | 第25页 |
| 2.1.7 实时荧光定量PCR反应程序和体系 | 第25页 |
| 2.1.8 20130629002S01菌液制备 | 第25-26页 |
| 2.1.9 菌株20130629002S01对凡纳滨对虾的毒力检测 | 第26页 |
| 2.1.10 人工感染试验 | 第26页 |
| 2.1.11 组织病理学观察 | 第26-27页 |
| 2.1.12 样本采集和qPCR检测 | 第27页 |
| 2.2 结果 | 第27-33页 |
| 2.2.1 实验用虾的检测 | 第27页 |
| 2.2.2 qPCR标准曲线 | 第27页 |
| 2.2.3 VP_(AHPND)菌株20130629002S01对凡纳滨对虾的毒力检测 | 第27-28页 |
| 2.2.4 感染实验中对虾死亡率 | 第28-30页 |
| 2.2.5 组织病理观察 | 第30-32页 |
| 2.2.6 感染进程中VP_(AHPND)20130629002S01在凡纳滨对虾不同组织中的分布 | 第32-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 SHIV实时荧光定量PCR方法的建立 | 第35-44页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第35-38页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第35页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.4 对虾样品来源以及DNA提取 | 第36页 |
| 3.1.5 引物与TaqMan探针的设计 | 第36页 |
| 3.1.6 引物和探针浓度优化 | 第36-37页 |
| 3.1.7 质粒构建与标准曲线制作 | 第37页 |
| 3.1.8 特异性试验 | 第37页 |
| 3.1.9 灵敏度试验 | 第37-38页 |
| 3.1.10 临床对虾样品检测 | 第38页 |
| 3.2 结果 | 第38-42页 |
| 3.2.1 实时荧光定量PCR反应程序与反应体系 | 第38页 |
| 3.2.2 特异性试验 | 第38-39页 |
| 3.2.3 灵敏度试验 | 第39-41页 |
| 3.2.4 临床对虾样品检测 | 第41-42页 |
| 3.3 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 SHIV在凡纳滨对虾不同组织中的定量检测 | 第44-49页 |
| 4.1 实验材料及方法 | 第44-46页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第44页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第44页 |
| 4.1.4 实验用对虾的病原检测 | 第44-45页 |
| 4.1.5 人工感染试验病料处理 | 第45页 |
| 4.1.6 人工感染试验和样本采集 | 第45页 |
| 4.1.7 对虾样品DNA提取 | 第45页 |
| 4.1.8 实时荧光定量PCR反应程序与反应体系 | 第45-46页 |
| 4.1.9 质粒构建和标准曲线制作 | 第46页 |
| 4.1.10 实时荧光定量PCR检测样品 | 第46页 |
| 4.2 结果 | 第46-47页 |
| 4.2.1 实验用虾的检测 | 第46页 |
| 4.2.2 凡纳滨对虾不同组织的SHIV检测结果 | 第46-47页 |
| 4.3 讨论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
