| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩写词 | 第8-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-19页 |
| 1.1 隐孢子虫病预防现状 | 第14-15页 |
| 1.2 隐孢子虫病治疗现状 | 第15-16页 |
| 1.2.1 中药治疗 | 第15页 |
| 1.2.2 化学合成药 | 第15页 |
| 1.2.3 生物制剂 | 第15-16页 |
| 1.2.4 其他药物 | 第16页 |
| 1.3 隐孢子虫入侵机制研究 | 第16-17页 |
| 1.4 棒状体蛋白研究 | 第17页 |
| 1.5 SUSHI结构域的研究 | 第17-18页 |
| 1.6 实验意义 | 第18-19页 |
| 2 隐孢子虫棒状体CGD8_2530蛋白SUSHI结构域基因的原核表达及定位 | 第19-40页 |
| 2.1 材料及方法 | 第19页 |
| 2.2 试验材料 | 第19-22页 |
| 2.2.1 虫种与实验动物 | 第19页 |
| 2.2.2 质粒与菌株 | 第19页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.4 清 | 第20页 |
| 2.2.5 主要试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.2.6 主要仪器 | 第22页 |
| 2.3 方法 | 第22-32页 |
| 2.3.1 引物设计及合成 | 第22页 |
| 2.3.2 目的基因的PCR扩增 | 第22-23页 |
| 2.3.3 核酸电泳胶回收 | 第23页 |
| 2.3.4 目的片段与克隆载体的连接 | 第23页 |
| 2.3.5 重组克隆质粒的转化 | 第23-24页 |
| 2.3.6 重组质粒pMD18-T-sushi的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.3.7 sushi结构域基因的序列测定和分析 | 第25页 |
| 2.3.8 原核表达质粒pET-28a-sushi的构建 | 第25-26页 |
| 2.3.9 连接产物的转化 | 第26-27页 |
| 2.3.10 重组质粒pET28a-sushi的鉴定 | 第27页 |
| 2.3.11 重组质粒pET-28a-sushi转化菌的诱导表达 | 第27-29页 |
| 2.3.12 重组表达产物的纯化 | 第29-30页 |
| 2.3.13 Western blot分析 | 第30-31页 |
| 2.3.14 重组sushi蛋白兔抗血清的制备及鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.15 Sushi蛋白的定位分析 | 第32页 |
| 2.4 结果 | 第32-38页 |
| 2.4.1 目的基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.4.2 重组质粒pMD18-T-sushi的鉴定 | 第33页 |
| 2.4.3 sushi结构域基因的序列测定和分析 | 第33-34页 |
| 2.4.4 原核表达质粒pET-28a-sushi的鉴定 | 第34页 |
| 2.4.5 重组质粒pET-28a-sushi转化菌的诱导表达及表达产物的纯化 | 第34-36页 |
| 2.4.6 重组sushi蛋白的Western blot分析 | 第36-37页 |
| 2.4.7 重组蛋白免疫血清的ELISA鉴定 | 第37页 |
| 2.4.8 Sushi结构域蛋白的免疫定位 | 第37-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-40页 |
| 2.5.1 抗原基因的选择 | 第38页 |
| 2.5.2 表达载体的选择 | 第38-40页 |
| 3 隐孢子虫棒状体CGD8_2530蛋白SUSHI结构域基因真核重组质粒的构建 | 第40-47页 |
| 3.1 材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 虫种与实验动物 | 第40页 |
| 3.1.2 质粒、菌株 | 第40页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第40页 |
| 3.1.4 主要溶液的配制 | 第40-41页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-44页 |
| 3.2.1 引物设计及合成 | 第41页 |
| 3.2.2 目的基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第42页 |
| 3.2.4 PCR产物回收 | 第42页 |
| 3.2.5 目的片段与克隆载体的连接 | 第42页 |
| 3.2.6 链接产物的转化 | 第42页 |
| 3.2.7 重组质粒pMD18-T-Psushi的鉴定 | 第42页 |
| 3.2.8 真核表达质粒pVAX-sushi的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.9 连接产物的转化 | 第43页 |
| 3.2.10 重组质粒pVAX-shushi的鉴定 | 第43页 |
| 3.2.11 重组质粒pVAX-shushi的大量提取 | 第43-44页 |
| 3.3 结果 | 第44-46页 |
| 3.3.1 目的基因的PCR扩增 | 第44页 |
| 3.3.2 重组质粒pMD18-T-Psu化i的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 重组质粒pMD18-TT-sushi的序列测定 | 第45页 |
| 3.3.4 真核表达质粒pVAX-sushi的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 4 隐孢子虫棒状体CGD8_2530蛋白SUSHI结构域基因亚单位疫苗及核酸疫苗的动物保护性研究 | 第47-59页 |
| 4.1 试验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 虫种与实验动物 | 第47页 |
| 4.1.2 质粒、蛋白、虫株 | 第47页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.4 主要溶液的配制 | 第48页 |
| 4.1.5 主要仪器 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 4.2.1 动物分组及免疫 | 第48页 |
| 4.2.2 体液免疫水平的检测 | 第48-49页 |
| 4.2.3 细胞免疫水平的检测 | 第49页 |
| 4.2.4 小鼠粪便卵囊排出检测 | 第49-51页 |
| 4.2.5 统计学分析 | 第51页 |
| 4.3 结果 | 第51-57页 |
| 4.3.1 体液免疫水平检测 | 第52页 |
| 4.3.2 细胞免疫水平检测 | 第52-55页 |
| 4.3.3 Real-time PCR标准曲线的绘制 | 第55-56页 |
| 4.3.4 动物保护实验 | 第56-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 全文总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第67页 |
