| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第18-26页 |
| 1.1 引言 | 第18-19页 |
| 1.2 水杨酸简介 | 第19页 |
| 1.2.1 水杨酸的结构及性质 | 第19页 |
| 1.2.2 水杨酸的应用 | 第19页 |
| 1.3 酿酒酵母中的莽草酸途径 | 第19-22页 |
| 1.3.1 途径介绍 | 第19-20页 |
| 1.3.2 关键酶及其调控 | 第20-21页 |
| 1.3.3 利用莽草酸途径其他生物合成 | 第21-22页 |
| 1.4 水杨酸合成的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4.1 化学法合成水杨酸 | 第22-23页 |
| 1.4.2 生物合成水杨酸进展 | 第23页 |
| 1.4.3 水杨酸对酿酒酵母毒性研究 | 第23页 |
| 1.5 本课题立项依据及研究内容 | 第23-26页 |
| 1.5.1 立项依据 | 第23-24页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.5.3 创新点 | 第25-26页 |
| 第二章 水杨酸外源途径构建与表达发酵 | 第26-44页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 菌株 | 第26页 |
| 2.2.2 载体 | 第26-27页 |
| 2.2.3 培养基 | 第27-28页 |
| 2.2.4 实验仪器及试剂 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.3.2 PCR反应 | 第30页 |
| 2.3.3 胶回收 | 第30-31页 |
| 2.3.4 酶切 | 第31页 |
| 2.3.5 柱回收 | 第31-32页 |
| 2.3.6 连接体系 | 第32页 |
| 2.3.7 大肠杆菌化学法转化 | 第32-33页 |
| 2.3.8 阳性克隆转化筛选 | 第33页 |
| 2.3.9 大肠杆菌质粒提取 | 第33-34页 |
| 2.3.10 酿酒酵母醋酸锂转化法 | 第34-35页 |
| 2.3.11 水杨酸液相检测 | 第35页 |
| 2.4 实验结果 | 第35-42页 |
| 2.4.1 水杨酸标准曲线 | 第35-36页 |
| 2.4.2 水杨酸外援途径构建 | 第36-38页 |
| 2.4.3 重组质粒酵母化转及发酵 | 第38-40页 |
| 2.4.4 水杨酸添加抑制实验 | 第40-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-44页 |
| 第三章 增强酿酒酵母自身莽草酸途径代谢通量提高水杨酸产量 | 第44-56页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-45页 |
| 3.2.1 菌株 | 第44页 |
| 3.2.2 载体 | 第44-45页 |
| 3.2.3 培养基 | 第45页 |
| 3.2.4 实验仪器及试剂 | 第45页 |
| 3.3 实验方法 | 第45-48页 |
| 3.3.1 引物设计 | 第46-47页 |
| 3.3.2 PCR反应 | 第47页 |
| 3.3.3 胶回收 | 第47页 |
| 3.3.4 酶切 | 第47页 |
| 3.3.5 柱回收 | 第47页 |
| 3.3.6 连接体系 | 第47页 |
| 3.3.7 大肠杆菌化学法转化 | 第47页 |
| 3.3.8 阳性克隆转化筛选 | 第47页 |
| 3.3.9 大肠杆菌质粒提取 | 第47页 |
| 3.3.10 酿酒酵母醋酸锂转化法 | 第47页 |
| 3.3.11 水杨酸液相检测 | 第47页 |
| 3.3.12 酿酒酵母基因组提取 | 第47-48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-54页 |
| 3.4.1 过表达DAHP合酶Aro4质粒构建与发酵 | 第48-50页 |
| 3.4.2 基因组整合替换Aro1启动子为TEF1启动子并发酵产水杨酸 | 第50-54页 |
| 3.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第四章 通过异源表达大肠杆菌莽草酸途径提高水杨酸产量 | 第56-74页 |
| 4.1 引言 | 第56-57页 |
| 4.2 实验材料 | 第57-59页 |
| 4.2.1 菌株 | 第57页 |
| 4.2.2 载体 | 第57-58页 |
| 4.2.3 培养基 | 第58-59页 |
| 4.2.4 实验仪器及试剂 | 第59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-62页 |
| 4.3.1 引物设计 | 第60-62页 |
| 4.3.2 PCR反应 | 第62页 |
| 4.3.3 胶回收 | 第62页 |
| 4.3.4 酶切 | 第62页 |
| 4.3.5 柱回收 | 第62页 |
| 4.3.6 连接体系 | 第62页 |
| 4.3.7 大肠杆菌化学法转化 | 第62页 |
| 4.3.8 阳性克隆转化筛选 | 第62页 |
| 4.3.9 大肠杆菌质粒提取 | 第62页 |
| 4.3.10 酿酒酵母醋酸锂转化法 | 第62页 |
| 4.3.11 水杨酸液相检测 | 第62页 |
| 4.3.12 酿酒酵母质粒提取 | 第62页 |
| 4.4 实验结果 | 第62-73页 |
| 4.4.1 大肠杆菌莽草酸途径模块一质粒构建 | 第63-64页 |
| 4.4.2 大肠杆菌莽草酸途径模块二质粒构建 | 第64-66页 |
| 4.4.3 大肠杆菌莽草酸途径模块三质粒构建 | 第66-68页 |
| 4.4.4 大肠杆菌莽草酸途径模块二模块三联合构建 | 第68-69页 |
| 4.4.5 大肠杆菌莽草酸途径模块发酵 | 第69-73页 |
| 4.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 第五章 通过增强磷酸戊糖途径提高水杨酸产量 | 第74-88页 |
| 5.1 引言 | 第74页 |
| 5.2 实验材料 | 第74页 |
| 5.2.1 菌株 | 第74页 |
| 5.2.2 载体 | 第74页 |
| 5.2.3 培养基 | 第74页 |
| 5.2.4 实验仪器及试剂 | 第74页 |
| 5.3 实验方法 | 第74-77页 |
| 5.3.1 引物设计 | 第75-76页 |
| 5.3.2 PCR反应 | 第76页 |
| 5.3.3 胶回收 | 第76页 |
| 5.3.4 酶切 | 第76页 |
| 5.3.5 柱回收 | 第76页 |
| 5.3.6 连接体系 | 第76页 |
| 5.3.7 大肠杆菌化学法转化 | 第76页 |
| 5.3.8 阳性克隆转化筛选 | 第76页 |
| 5.3.9 大肠杆菌质粒提取 | 第76页 |
| 5.3.10 酿酒酵母醋酸锂转化法 | 第76-77页 |
| 5.3.11 水杨酸液相检测 | 第77页 |
| 5.4 实验结果 | 第77-86页 |
| 5.4.1 PPP途径单基因表达质粒构建 | 第77-80页 |
| 5.4.2 PPP途径多基因组合表达质粒构建 | 第80-83页 |
| 5.4.3 PPP途径单基因表达发酵 | 第83-84页 |
| 5.4.4 PPP途径多基因组合表达发酵 | 第84-86页 |
| 5.5 本章小结 | 第86-88页 |
| 第六章 结论与展望 | 第88-90页 |
| 6.1 结论 | 第88页 |
| 6.2 展望 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-94页 |
| 附录 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第98-100页 |
| 作者和导师简介 | 第100-101页 |
| 附件 | 第101-102页 |
