| 摘要 | 第2-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一部分 化学缺氧对绒毛外滋养细胞中TRPC6表达的影响 | 第13-30页 |
| 材料与方法 | 第13-24页 |
| 1.1 研究对象 | 第13页 |
| 1.2 主要实验试剂及相关液体配制 | 第13-15页 |
| 1.2.1 细胞培养主要实验试剂及相关液体配制 | 第13页 |
| 1.2.2 突光定量pcr主要试剂 | 第13-14页 |
| 1.2.3 western blot主要试剂及相关液体配置 | 第14-15页 |
| 1.2.4 钙离子浓度测定主要试剂及相关液体配置 | 第15页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第15-16页 |
| 1.4 实验分组 | 第16页 |
| 1.5 细胞培养 | 第16-17页 |
| 1.5.1 细胞复苏 | 第16页 |
| 1.5.2 细胞换液及消化 | 第16-17页 |
| 1.5.3 细胞冻存 | 第17页 |
| 1.5.4 滋养细胞化学缺氧模型的建立 | 第17页 |
| 1.6 荧光定量PCR检测各组细胞TRPC6 mRNA表达 | 第17-20页 |
| 1.6.1 提取各组细胞中总RNA | 第17-18页 |
| 1.6.2 紫外分光光度计检测总样品的纯度及浓度 | 第18页 |
| 1.6.3 引物设计 | 第18-19页 |
| 1.6.4 引物稀释 | 第19页 |
| 1.6.5 反转录cDNA | 第19页 |
| 1.6.6 RT-PCR反应 | 第19-20页 |
| 1.7 蛋白免疫印记（western blot）检测各组TRPC6蛋白表达情况 | 第20-23页 |
| 1.7.1 Western blot基本原理 | 第20页 |
| 1.7.2 各组细胞内蛋白提取方法 | 第20-21页 |
| 1.7.3 制胶 | 第21页 |
| 1.7.4 上样 | 第21页 |
| 1.7.5 电泳 | 第21页 |
| 1.7.6 转膜 | 第21-22页 |
| 1.7.7 考马斯亮兰染色 | 第22页 |
| 1.7.8 封闭 | 第22页 |
| 1.7.9 抗体孵育 | 第22页 |
| 1.7.10 结果分析 | 第22-23页 |
| 1.8 利用fluo-3 荧光染料检测观察各组细胞细胞内钙离子的变化 | 第23页 |
| 1.8.1 Fluo-3/AM配制 | 第23页 |
| 1.8.2 细胞悬液获取 | 第23页 |
| 1.8.3 荧光染料染色 | 第23页 |
| 1.8.4 倒置荧光显微镜观察细胞内钙离子染色情况 | 第23页 |
| 1.8.5 荧光结果分析 | 第23页 |
| 1.9 统计学方法 | 第23-24页 |
| 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.1 缺氧后TRPC6 mRNA表达增加 | 第24-25页 |
| 2.2 缺氧后TRPC6蛋白表达增加 | 第25页 |
| 2.3 缺氧后细胞内钙离子发生改变 | 第25-27页 |
| 讨论 | 第27-30页 |
| 第二部分 过表达TRPC6蛋白对JEG3生物学行为的影响及其在子痫前期发病机制的研究 | 第30-42页 |
| 材料与方法 | 第30-34页 |
| 1.1 研究对象 | 第30页 |
| 1.2 主要实验试剂及相关液体配制 | 第30-31页 |
| 1.2.1 细胞培养主要实验试剂及相关液体配制： | 第30页 |
| 1.2.2 慢病毒转染主要试剂及相关液体配制 | 第30页 |
| 1.2.3 突光定量pcr主要试剂： | 第30页 |
| 1.2.4 western blot主要试剂及相关液体配置： | 第30-31页 |
| 1.2.5 cck8主要试剂及相关液体配置： | 第31页 |
| 1.3 主要仪器与设备 | 第31页 |
| 1.4 实验分组 | 第31页 |
| 1.5 获取慢病毒稳转株 | 第31-32页 |
| 1.5.1 慢病毒转染方法 | 第31页 |
| 1.5.2 确定嘌呤霉素的筛选浓度 | 第31页 |
| 1.5.3 稳转株的筛选 | 第31-32页 |
| 1.6 荧光定量PCR检测各组细胞中caspase3及caspase12 mRNA的表达情况 | 第32页 |
| 1.6.1 引物设计 | 第32页 |
| 1.7 Western blot检测各组细胞相关蛋白的表达 | 第32页 |
| 1.8 CCK8技术检测细胞的增殖能力变化 | 第32-33页 |
| 1.9 统计学方法 | 第33-34页 |
| 实验结果 | 第34-40页 |
| 2.1 慢病毒转染结果 | 第34-35页 |
| 2.2 慢病毒转染过表达TRPC6蛋白后凋亡因子表达增加 | 第35-39页 |
| 2.2.1 过表达TRPC6后caspase3及caspase12 mRNA表达增加 | 第35-38页 |
| 2.2.2 过表达TRPC6后caspase3及caspase12蛋白表达增加 | 第38-39页 |
| 2.3 TRPC6过表达后细胞增殖能力下降 | 第39-40页 |
| 讨论 | 第40-42页 |
| 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 综述 | 第47-57页 |
| 综述参考文献 | 第53-57页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第57-58页 |
| 缩略词表（附录） | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
