| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 核盘菌中microRNA-like RNAs的预测和验证 | 第14-48页 |
| 1. 前言 | 第14-33页 |
| 1.1. 核盘菌简介 | 第14-20页 |
| 1.1.1. 核盘菌的危害 | 第14页 |
| 1.1.2. 防治核盘菌的策略 | 第14-16页 |
| 1.1.3. 核盘菌菌核发育及其形成机理 | 第16-19页 |
| 1.1.4. 核盘菌致病机理 | 第19-20页 |
| 1.2. miRNAs的研究进展 | 第20-32页 |
| 1.2.1. miRNAs简介 | 第20-21页 |
| 1.2.2. miRNAs发生及作用机制 | 第21-23页 |
| 1.2.3. miRNAs的起源和进化 | 第23-25页 |
| 1.2.4. miRNAs的生物学功能 | 第25-26页 |
| 1.2.5. 鉴定新的miRNAs的方法 | 第26-29页 |
| 1.2.6. microRNA靶基因的筛选及鉴定方法 | 第29-31页 |
| 1.2.7. miRNA的定量检测方法 | 第31-32页 |
| 1.3. 本研究的目的与意义 | 第32-33页 |
| 2. 材料与方法 | 第33-35页 |
| 2.1. 材料 | 第33页 |
| 2.2. 方法 | 第33-35页 |
| 2.2.1. 核盘菌总RNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.2. 小RNAs的克隆和测序 | 第33页 |
| 2.2.3. 测序结果分析 | 第33-34页 |
| 2.2.4. Northern杂交分析 | 第34页 |
| 2.2.5. Real-time PCR | 第34-35页 |
| 3. 结果 | 第35-44页 |
| 3.1. 核盘菌拥有完整的miRNAs加工合成体系 | 第35-36页 |
| 3.2. 核盘菌中小RNA的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3. 小RNAs注释和分类 | 第37页 |
| 3.4. 对核盘菌中潜在的miRNAs-like基因的分析 | 第37-41页 |
| 3.5. 核盘菌中milRNAs的表达谱分析 | 第41-44页 |
| 4. 结论与讨论 | 第44-48页 |
| 第二章 Ss-CAD结构与功能分析 | 第48-106页 |
| 1. 肉桂醇脱氢酶的研究进展 | 第48-58页 |
| 1.1. 肉桂醇脱氢酶简介 | 第48页 |
| 1.2. 肉桂醇脱氢酶参与木质素单体的合成 | 第48-50页 |
| 1.3. CAD基因家族结构特征及分类 | 第50-51页 |
| 1.4. CAD基因的结构类型 | 第51-53页 |
| 1.5. CAD酶学性质 | 第53-54页 |
| 1.6. CAD的功能和表达特性 | 第54-55页 |
| 1.7. CAD在生产中的应用 | 第55-56页 |
| 1.8. 本研究目的与意义 | 第56-58页 |
| 2. 材料与方法 | 第58-68页 |
| 2.1. 材料 | 第58页 |
| 2.1.1. 菌株及培养方法 | 第58页 |
| 2.1.2. 质粒及载体 | 第58页 |
| 2.1.3. 抗生素、酶及其它试剂 | 第58页 |
| 2.2. 方法 | 第58-68页 |
| 2.2.1. 核盘菌总基因组DNA的提取 | 第58-59页 |
| 2.2.2. 核盘菌总RNA的提取 | 第59-60页 |
| 2.2.3. 大肠杆菌的热击转化 | 第60页 |
| 2.2.4. 农杆菌电击转化 | 第60-61页 |
| 2.2.5. 质粒DNA的小量快速提取 | 第61页 |
| 2.2.6. 系统进化树分析 | 第61页 |
| 2.2.7. Real-Time PCR | 第61-62页 |
| 2.2.8. 基因沉默载体的构建 | 第62-63页 |
| 2.2.9. 沉默转化子的获得 | 第63-64页 |
| 2.2.10. 转化子的PCR鉴定和测序分析 | 第64页 |
| 2.2.11. 基因沉默转化子沉默效率的检测 | 第64页 |
| 2.2.12. Bradford法测定蛋白浓度 | 第64-65页 |
| 2.2.13. CAD活性的检测 | 第65页 |
| 2.2.14. 沉默转化子的生物学特性分析 | 第65-66页 |
| 2.2.15. 菌核的大小及重量的测定 | 第66页 |
| 2.2.16. 沉默转化子的生长速度分析 | 第66页 |
| 2.2.17. 沉默转化子的致病力分析 | 第66页 |
| 2.2.18. NBT染色观察活性氧的产量 | 第66-67页 |
| 2.2.19. 核盘菌对H2O2耐受性的分析 | 第67页 |
| 2.2.20. 辅酶NADH及NADP+/NADPH对菌核发育的影响 | 第67页 |
| 2.2.21. 半乳糖对Ss-CAD基因表达水平的影响 | 第67-68页 |
| 3. 结果与分析 | 第68-102页 |
| 3.1. SS1G_10803基因在菌核发育阶段大量表达 | 第68-69页 |
| 3.2. Ss-10803基因编码的蛋白及其结构分析 | 第69-72页 |
| 3.3. Ss-CAD的系统进化发育分析 | 第72-74页 |
| 3.4. Ss-CAD基因沉默 | 第74-79页 |
| 3.4.1. Ss-CAD沉默载体的构建 | 第74页 |
| 3.4.2. 转化子的PCR鉴定和测序结果分析 | 第74-75页 |
| 3.4.3. 筛选沉默效率高的转化子 | 第75-77页 |
| 3.4.4. Ss-CAD基因沉默特异性的检测 | 第77-79页 |
| 3.5. 沉默转化子中的CAD活性 | 第79-80页 |
| 3.6. Ss-CAD基因沉默转化子的形态特征 | 第80-83页 |
| 3.7. Ss-CAD基因沉默对核盘菌菌丝生长与致病力的影响 | 第83-85页 |
| 3.8. Ss-CAD可影响NADP+/NADPH平衡 | 第85-88页 |
| 3.9. Ss-CAD沉默转化子的ROS产量减少 | 第88-89页 |
| 3.10. Ss-CAD沉默转化子对H2O2的耐受力更强 | 第89-91页 |
| 3.11. 外源氧化物能恢复Ss-CAD沉默转化子的菌核发育能力 | 第91-93页 |
| 3.12. Ss-CAD调控菌核形成与Ss-Nox代谢途径相关 | 第93-96页 |
| 3.13. Ss-Nox R沉默后对核盘菌的影响与Ss-Nox的作用相一致 | 第96-99页 |
| 3.14. 超表达Ss-Nox1可使Ss-CAD沉默菌株恢复菌核形成能力 | 第99-102页 |
| 4. 结论与讨论 | 第102-106页 |
| 参考文献 | 第106-126页 |
| 附录 引物 | 第126-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
