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基于RNAi抗PRSV番木瓜株系的培育及其分子特征验证

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
前言第10-24页
    1.1 培育抗番木瓜环斑病毒(PRSV)番木瓜的研究进展第10-19页
        1.1.1 番木瓜概述第10-11页
        1.1.2 番木瓜主要病害第11-12页
        1.1.3 番木瓜环斑病毒(PRSV)第12-15页
        1.1.4 转基因抗病毒策略第15-17页
        1.1.5 番木瓜抗病毒研究进展第17-19页
    1.2 基于RNAI策略的转基因抗病毒研究第19-22页
        1.2.1 RNAi作用机制第19-20页
        1.2.2 RNAi特点第20-21页
        1.2.3 RNAi介导抗病毒方法第21-22页
    1.3 研究目的与意义第22-23页
    1.4 技术路线第23-24页
2 材料与方法第24-43页
    2.1 试验材料第24-27页
        2.1.1 植物材料第24页
        2.1.2 质粒、菌株与病毒株系第24页
        2.1.3 试剂与仪器第24-25页
        2.1.4 培养基第25页
        2.1.5 PCR引物使用第25-27页
    2.2 实验方法第27-43页
        2.2.1 制备转化番木瓜的受体材料第27页
        2.2.2 基因枪法转化番木瓜第27-28页
        2.2.3 转基因阳性植株的筛选第28-30页
        2.2.4 微滴数字PCR(ddPCR)进一步验证转化特异事件第30-31页
        2.2.5 高效热不对称性交错PCR(hiTAIL-PCR)验证转化事件第31-35页
        2.2.6 hiTAIL-PCR插入位点的分析第35页
        2.2.7 Southern blotting分析转基因番木瓜的拷贝数第35-39页
        2.2.8 转基因番木瓜接种PRSV第39-40页
        2.2.9 RT-PCR检测病毒积累量第40-41页
        2.2.10 荧光定量PCR检测病毒积累量第41-43页
3 结果与分析第43-51页
    3.1 转化体系阳性植株的筛选第43页
    3.2 转入CP基因片段植株的分子特征描述第43-48页
        3.2.1 微滴数字PCR(ddPCR)定量的结果分析第43-45页
        3.2.2 hiTAIL-PCR验证转化事件插入位点第45-47页
        3.2.3 Southern blotting分析转基因番木瓜的拷贝数第47-48页
    3.3 转基因番木瓜的PRSV的抗性评价第48-51页
        3.3.1 转基因番木瓜接种PRSV第48-49页
        3.3.2 荧光定量PCR第49-51页
4 讨论第51-55页
    4.1 番木瓜的转化效率第51页
    4.2 转基因植株的分子验证第51-52页
    4.3 转基因株系的抗性分析第52-54页
    4.4 下一步工作第54-55页
5 结论第55-56页
参考文献第56-62页
附录一 相关药品的配置第62-63页
附录二 项目来源及论文发表情况第63-64页
致谢第64页

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