| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 培育抗番木瓜环斑病毒(PRSV)番木瓜的研究进展 | 第10-19页 |
| 1.1.1 番木瓜概述 | 第10-11页 |
| 1.1.2 番木瓜主要病害 | 第11-12页 |
| 1.1.3 番木瓜环斑病毒(PRSV) | 第12-15页 |
| 1.1.4 转基因抗病毒策略 | 第15-17页 |
| 1.1.5 番木瓜抗病毒研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2 基于RNAI策略的转基因抗病毒研究 | 第19-22页 |
| 1.2.1 RNAi作用机制 | 第19-20页 |
| 1.2.2 RNAi特点 | 第20-21页 |
| 1.2.3 RNAi介导抗病毒方法 | 第21-22页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 1.4 技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-43页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 质粒、菌株与病毒株系 | 第24页 |
| 2.1.3 试剂与仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基 | 第25页 |
| 2.1.5 PCR引物使用 | 第25-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-43页 |
| 2.2.1 制备转化番木瓜的受体材料 | 第27页 |
| 2.2.2 基因枪法转化番木瓜 | 第27-28页 |
| 2.2.3 转基因阳性植株的筛选 | 第28-30页 |
| 2.2.4 微滴数字PCR(ddPCR)进一步验证转化特异事件 | 第30-31页 |
| 2.2.5 高效热不对称性交错PCR(hiTAIL-PCR)验证转化事件 | 第31-35页 |
| 2.2.6 hiTAIL-PCR插入位点的分析 | 第35页 |
| 2.2.7 Southern blotting分析转基因番木瓜的拷贝数 | 第35-39页 |
| 2.2.8 转基因番木瓜接种PRSV | 第39-40页 |
| 2.2.9 RT-PCR检测病毒积累量 | 第40-41页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR检测病毒积累量 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-51页 |
| 3.1 转化体系阳性植株的筛选 | 第43页 |
| 3.2 转入CP基因片段植株的分子特征描述 | 第43-48页 |
| 3.2.1 微滴数字PCR(ddPCR)定量的结果分析 | 第43-45页 |
| 3.2.2 hiTAIL-PCR验证转化事件插入位点 | 第45-47页 |
| 3.2.3 Southern blotting分析转基因番木瓜的拷贝数 | 第47-48页 |
| 3.3 转基因番木瓜的PRSV的抗性评价 | 第48-51页 |
| 3.3.1 转基因番木瓜接种PRSV | 第48-49页 |
| 3.3.2 荧光定量PCR | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 番木瓜的转化效率 | 第51页 |
| 4.2 转基因植株的分子验证 | 第51-52页 |
| 4.3 转基因株系的抗性分析 | 第52-54页 |
| 4.4 下一步工作 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录一 相关药品的配置 | 第62-63页 |
| 附录二 项目来源及论文发表情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
